【摘要】：近年來中國養(yǎng)殖業(yè)中出現(xiàn)了一個的朝陽產(chǎn)業(yè),它慢慢成為了中國養(yǎng)殖業(yè)濃墨重彩的一筆,它就是鵝養(yǎng)殖業(yè)。制約鵝養(yǎng)殖業(yè)及其副業(yè)發(fā)展的因素有很多其中鵝的季節(jié)性產(chǎn)蛋特性是最關(guān)鍵的一環(huán)。為了解決這一問題,我們需要研究鵝卵泡的發(fā)育原理從而更好的助力鵝養(yǎng)殖業(yè)的發(fā)展�，F(xiàn)在已經(jīng)有學者研究發(fā)現(xiàn),ERK信號通路可以通過一些途徑來調(diào)控家禽的等級前卵泡的發(fā)育狀態(tài)。本試驗采集籽鵝等級前卵泡并以此為試驗樣本。使用qPCR技術(shù)、Western Blot技術(shù)和IHC技術(shù)用來檢測目的基因mRNA水平以及蛋白質(zhì)水平的表達情況和目的基因在籽鵝等級前卵泡中的表達位點情況。研究結(jié)果如下:(1)qPCR試驗技術(shù)研究籽鵝等級前卵泡中ERK信號通路中關(guān)鍵基因的mRNA表達水平,并檢驗其顯著性。結(jié)果顯示,在籽鵝五種等級前卵泡中所有目的基因均有表達并且數(shù)據(jù)結(jié)果存在著顯著性差異(p0.05)。其中Raf1、Myc、Mek1基因的表達規(guī)律呈現(xiàn)先增加后減少再增加再減少的“M”型趨勢,目的基因Raf1、Myc在LWF中的表達量最高,目的基因Mek1在SWF中的表達量最高;目的基因Hras、Mos、ERK的表達規(guī)律呈現(xiàn)持續(xù)減少趨勢,在PF卵泡中的表達量最高。目的基因Srf的表達規(guī)律呈現(xiàn)先減少再增加再減少再增加的“W”型趨勢,其表達量在SYF中最高。(2)通過相關(guān)性分析qPCR的試驗結(jié)果,試驗結(jié)果表明在不同發(fā)育階段的卵泡中ERK信號傳導(dǎo)途徑中相鄰基因之間的相關(guān)性存在差異,不同發(fā)育階段的不同等級卵泡的相關(guān)性與信號傳導(dǎo)途徑中任意兩個基因的相關(guān)性也存在一定的差異。(3)通過免疫組織化學試驗對籽鵝五種等級前卵泡中目的蛋白Hras、Mek1和ERK的表達位點進行分析。結(jié)果表明,在籽鵝五種等級前卵泡中的顆粒層細胞(GC)和膜層細胞(TC)中都檢測出了表達位點,并且結(jié)果為陽性表達。(4)通過蛋白免疫印跡技術(shù)研究了籽鵝五種等級前卵泡中目的基因Hras、Mek1和ERK的蛋白質(zhì)表達水平。結(jié)果顯示,五種等級前卵泡中三種目的蛋白均有表達。其中目的蛋白ERK在SWF中表達量最高,在SYF中表達量最低(P0.05)。目的蛋白Hras在SWF中表達量最高,在LWF中表達量最低(P0.05)。目的蛋白Mek1在PF中表達量最高,在MWF中表達量最低(P0.05)。(5)結(jié)合ERK信號通路上基因的表達規(guī)律及卵泡發(fā)育規(guī)律可發(fā)現(xiàn),ERK信號通路對籽鵝等級前卵泡存在一定的促進作用。
【圖文】：

隨著卵泡的進一步發(fā)育，其體積也隨之迅速增量卵黃。同時，卵泡分化形成放射帶，結(jié)締組織開始受到下丘腦到垂體到性腺的調(diào)控軸調(diào)控，從而泡的直徑大小對鵝的卵泡進行分類。本文將卵泡分級卵泡[38]。如圖 1.1 所示，鵝產(chǎn)蛋期的卵巢內(nèi)會有甚至數(shù)百個體積小的等級前卵泡[39]。按照直徑由，F(xiàn)2 卵泡，F(xiàn)3 卵泡，F(xiàn)4 卵泡，F(xiàn)5 卵泡和 F6 卵泡[40]。根據(jù)直徑大小等級前卵泡 10-15mm 為 SY MWF 和 2-4mm 為 SWF。小于 2mm 的為初級卵泡黃”結(jié)構(gòu)并不像他的名字一樣是黃色的而是白色的行體內(nèi)外培養(yǎng) FSH 實驗發(fā)現(xiàn)，和體內(nèi)刺激不同的后并不會對卵泡的發(fā)育造成影響，而刺激等級卵泡。這表明等級前卵泡與等級卵泡的生長和發(fā)育之

圖 1.2 ERK 信號通路圖Fig.1.2 ERK signal path diagramERK 信號通路傳導(dǎo)途徑與經(jīng)典的三步酶促級聯(lián)反應(yīng)一致，Ras - Raf -MEK -ERK是ERK通路的主要途徑。細胞外的各種細胞外刺激與受體結(jié)合并釋放Ras。通過三磷酸鳥苷（GTP）與二磷酸鳥苷（GDP）結(jié)合激活 Ras，活化的 Ras 具有高親和力并與 Raf 的 N-末端結(jié)構(gòu)域結(jié)合，，將 Raf 從細胞質(zhì)轉(zhuǎn)移至胞膜，并且在胞膜上被 Raf 激酶激活[60]; 活化的 Raf 其 C 端催化結(jié)構(gòu)域與 MEK 結(jié)合，使其亞區(qū)中的兩個絲氨酸（Thr 和 Ser）磷酸化，激活 MEK; MEK 是一種罕見的雙重特異性激酶，可激活 ERK 的蘇氨酸，酪氨酸雙位點磷酸化后可激活 ERK[61]�；罨蟮� ERK 可以轉(zhuǎn)移到細胞核中，磷酸化多種轉(zhuǎn)錄因子，調(diào)控轉(zhuǎn)錄相關(guān)基因的表達，并最終介導(dǎo)細胞生長，分化，轉(zhuǎn)移和凋亡等過程[62]。ERK(extracellular signal-regulated kinase)信號通路是由 Sturgill 等人在 1986年首先報告的 MAPK 信號通路。剛開始學者們依據(jù)它的底物蛋白為其的命名十分混亂[63]。近年來，隨著科學研究的進展又發(fā)現(xiàn)許多 MAPK 家族成員，所以又重用名 ERK。
【學位授予單位】：吉林農(nóng)業(yè)大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2019
【分類號】：S835

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