【摘要】：賈第蟲(Giardia)與隱孢子蟲(Cryptosporidium)屬于重要的人獸共患性原蟲,其感染宿主廣,感染后臨床癥狀以腹瀉為主,并對畜牧業(yè)與養(yǎng)殖業(yè)造成巨大的經(jīng)濟損失。隱孢子蟲病不僅可以引起哺乳動物的嚴(yán)重腹瀉和禽類的呼吸道疾病,而且還可引起人的嚴(yán)重腹瀉以及繼發(fā)感染艾滋病(AIDS)病人,是這類病人死亡的主要原因之一。隱孢子蟲被列為150多種水傳病原中危害最大的一種微生物;被美國疾病控制和預(yù)防中心(CDC)列為B類生物戰(zhàn)劑。微小隱孢子蟲(C.parvum)引起的疾病為隱孢子蟲病,寄生于人和大多數(shù)哺乳動物,主要以腹瀉為主,嚴(yán)重時可危及生命。安氏隱孢子蟲(C.andersoni),主要引起幼齡動物的消化道和呼吸道疾病,導(dǎo)致其生產(chǎn)性能下降或死亡。十二指腸賈第蟲(G.duodenalis)寄生于人的膽囊和小腸中,主要寄生于十二指腸,引起的疾病為賈第蟲病,臨床表現(xiàn)主要為腹痛腹瀉、嘔吐發(fā)熱、消瘦厭食等。賈第蟲病在歐美等許多國家曾多次暴發(fā)流行,我國該病分布也很廣泛。據(jù)報導(dǎo)我國人賈第蟲的總感染率為2.52%,吉林省犬賈第蟲感染率高達25.20%。我國公布的城市供水水質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)和生活飲用水衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)均把隱孢子蟲和賈第蟲檢測作為必檢指標(biāo)。賈第蟲、微小隱孢子蟲與安氏隱孢子蟲的感染多因水源被其包囊或卵囊污染繼而引發(fā)感染,且其感染的共同癥狀主要為腹瀉,所以對賈第蟲、微小隱孢子蟲與安氏隱孢子蟲的檢測在公共安全方面尤為重要。當(dāng)牛羊被這三種寄生蟲感染時導(dǎo)致自身機能下降免疫力降低,無論是飼料利用率還是產(chǎn)奶量和出欄率都大大降低,并且牛羊在科研工作中作為重要的實驗用動物有著極其重要的影響,感染后用作實驗動物時直接影響實驗人員的實驗數(shù)據(jù)與結(jié)果分析。同時賈第蟲、隱孢子蟲屬于人獸共患寄生蟲,無論是對于養(yǎng)殖人員還是實驗人員都存在安全隱患,所以本試驗建立了實驗用牛、羊賈第蟲與隱孢子蟲多重PCR的方法檢測方法,并進行了流行病學(xué)調(diào)查,為實驗用動物的質(zhì)量控制及隱孢子蟲病及賈第蟲病的防治提供技術(shù)支持。實驗用羊微小隱孢子蟲與十二指腸賈第蟲雙重PCR的建立,選擇高度保守性隱孢子蟲18S rRNA基因與賈第蟲TPI基因設(shè)計引物,通過各項條件的優(yōu)化選擇,確定退火溫度為57℃,延伸時間為30s,靈敏度為5×10~2/g糞便,特異性良好。應(yīng)用已建立的實驗用羊微小隱孢子蟲與十二指腸賈第蟲雙重PCR方法,檢測自長春以及白城不同地區(qū)193份羊糞樣品,十二指腸賈第蟲陽性糞48.7%(94/193),基因型為聚集體A;微小隱孢子蟲陽性糞便樣為2.6%(5/193),基因型為C.parvum IIa。實驗用牛十二指腸賈第蟲、微小隱孢子蟲與安氏隱孢子蟲三重PCR的建立,選擇高度保守性隱孢子蟲18S rRNA基因與賈第蟲TPI基因設(shè)計引物,通過各項條件的優(yōu)化選擇,確定退火溫度為58℃,延伸時間為60s,靈敏度為1×10~3/g糞便,特異性良好。應(yīng)用已建立的實驗用牛十二指腸賈第蟲、微小隱孢子蟲與安氏隱孢子蟲三重PCR方法,檢測自長春不同地區(qū)的156份牛糞樣,十二指腸賈第蟲陽性糞便樣77.6%(121/156),基因型為聚集體A;微小隱孢子蟲陽性糞便樣3.2%(5/156),基因型為C.parvum genotype II、Human C.parvum genotype HFL5。
【圖文】：

圖1.1雙重PCR引物驗證M：DL2000marker1：微小隱孢子蟲；2：十二指腸賈第蟲

同退火溫度雙重 PCR 結(jié)M：DL2000 marker 59°C、57°C、55°C、53°nealing temperature DoublM：DL2000 markere is 59°C、57°C、55°C、5應(yīng)特異性實驗十二指腸賈第蟲與微小隱小隱孢子蟲均擴增出相應(yīng)、大腸桿菌 O157 作為模板有良好的特異性（見圖 1
【學(xué)位授予單位】：吉林大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號】：S855.99

【參考文獻】

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本文編號：2591553