【摘要】：賈第蟲(chóng)(Giardia)與隱孢子蟲(chóng)(Cryptosporidium)屬于重要的人獸共患性原蟲(chóng),其感染宿主廣,感染后臨床癥狀以腹瀉為主,并對(duì)畜牧業(yè)與養(yǎng)殖業(yè)造成巨大的經(jīng)濟(jì)損失。隱孢子蟲(chóng)病不僅可以引起哺乳動(dòng)物的嚴(yán)重腹瀉和禽類的呼吸道疾病,而且還可引起人的嚴(yán)重腹瀉以及繼發(fā)感染艾滋病(AIDS)病人,是這類病人死亡的主要原因之一。隱孢子蟲(chóng)被列為150多種水傳病原中危害最大的一種微生物;被美國(guó)疾病控制和預(yù)防中心(CDC)列為B類生物戰(zhàn)劑。微小隱孢子蟲(chóng)(C.parvum)引起的疾病為隱孢子蟲(chóng)病,寄生于人和大多數(shù)哺乳動(dòng)物,主要以腹瀉為主,嚴(yán)重時(shí)可危及生命。安氏隱孢子蟲(chóng)(C.andersoni),主要引起幼齡動(dòng)物的消化道和呼吸道疾病,導(dǎo)致其生產(chǎn)性能下降或死亡。十二指腸賈第蟲(chóng)(G.duodenalis)寄生于人的膽囊和小腸中,主要寄生于十二指腸,引起的疾病為賈第蟲(chóng)病,臨床表現(xiàn)主要為腹痛腹瀉、嘔吐發(fā)熱、消瘦厭食等。賈第蟲(chóng)病在歐美等許多國(guó)家曾多次暴發(fā)流行,我國(guó)該病分布也很廣泛。據(jù)報(bào)導(dǎo)我國(guó)人賈第蟲(chóng)的總感染率為2.52%,吉林省犬賈第蟲(chóng)感染率高達(dá)25.20%。我國(guó)公布的城市供水水質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)和生活飲用水衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)均把隱孢子蟲(chóng)和賈第蟲(chóng)檢測(cè)作為必檢指標(biāo)。賈第蟲(chóng)、微小隱孢子蟲(chóng)與安氏隱孢子蟲(chóng)的感染多因水源被其包囊或卵囊污染繼而引發(fā)感染,且其感染的共同癥狀主要為腹瀉,所以對(duì)賈第蟲(chóng)、微小隱孢子蟲(chóng)與安氏隱孢子蟲(chóng)的檢測(cè)在公共安全方面尤為重要。當(dāng)牛羊被這三種寄生蟲(chóng)感染時(shí)導(dǎo)致自身機(jī)能下降免疫力降低,無(wú)論是飼料利用率還是產(chǎn)奶量和出欄率都大大降低,并且牛羊在科研工作中作為重要的實(shí)驗(yàn)用動(dòng)物有著極其重要的影響,感染后用作實(shí)驗(yàn)動(dòng)物時(shí)直接影響實(shí)驗(yàn)人員的實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)與結(jié)果分析。同時(shí)賈第蟲(chóng)、隱孢子蟲(chóng)屬于人獸共患寄生蟲(chóng),無(wú)論是對(duì)于養(yǎng)殖人員還是實(shí)驗(yàn)人員都存在安全隱患,所以本試驗(yàn)建立了實(shí)驗(yàn)用牛、羊賈第蟲(chóng)與隱孢子蟲(chóng)多重PCR的方法檢測(cè)方法,并進(jìn)行了流行病學(xué)調(diào)查,為實(shí)驗(yàn)用動(dòng)物的質(zhì)量控制及隱孢子蟲(chóng)病及賈第蟲(chóng)病的防治提供技術(shù)支持。實(shí)驗(yàn)用羊微小隱孢子蟲(chóng)與十二指腸賈第蟲(chóng)雙重PCR的建立,選擇高度保守性隱孢子蟲(chóng)18S rRNA基因與賈第蟲(chóng)TPI基因設(shè)計(jì)引物,通過(guò)各項(xiàng)條件的優(yōu)化選擇,確定退火溫度為57℃,延伸時(shí)間為30s,靈敏度為5×10~2/g糞便,特異性良好。應(yīng)用已建立的實(shí)驗(yàn)用羊微小隱孢子蟲(chóng)與十二指腸賈第蟲(chóng)雙重PCR方法,檢測(cè)自長(zhǎng)春以及白城不同地區(qū)193份羊糞樣品,十二指腸賈第蟲(chóng)陽(yáng)性糞48.7%(94/193),基因型為聚集體A;微小隱孢子蟲(chóng)陽(yáng)性糞便樣為2.6%(5/193),基因型為C.parvum IIa。實(shí)驗(yàn)用牛十二指腸賈第蟲(chóng)、微小隱孢子蟲(chóng)與安氏隱孢子蟲(chóng)三重PCR的建立,選擇高度保守性隱孢子蟲(chóng)18S rRNA基因與賈第蟲(chóng)TPI基因設(shè)計(jì)引物,通過(guò)各項(xiàng)條件的優(yōu)化選擇,確定退火溫度為58℃,延伸時(shí)間為60s,靈敏度為1×10~3/g糞便,特異性良好。應(yīng)用已建立的實(shí)驗(yàn)用牛十二指腸賈第蟲(chóng)、微小隱孢子蟲(chóng)與安氏隱孢子蟲(chóng)三重PCR方法,檢測(cè)自長(zhǎng)春不同地區(qū)的156份牛糞樣,十二指腸賈第蟲(chóng)陽(yáng)性糞便樣77.6%(121/156),基因型為聚集體A;微小隱孢子蟲(chóng)陽(yáng)性糞便樣3.2%(5/156),基因型為C.parvum genotype II、Human C.parvum genotype HFL5。
【圖文】：

圖1.1雙重PCR引物驗(yàn)證M：DL2000marker1：微小隱孢子蟲(chóng)；2：十二指腸賈第蟲(chóng)

同退火溫度雙重 PCR 結(jié)M：DL2000 marker 59°C、57°C、55°C、53°nealing temperature DoublM：DL2000 markere is 59°C、57°C、55°C、5應(yīng)特異性實(shí)驗(yàn)十二指腸賈第蟲(chóng)與微小隱小隱孢子蟲(chóng)均擴(kuò)增出相應(yīng)、大腸桿菌 O157 作為模板有良好的特異性（見(jiàn)圖 1
【學(xué)位授予單位】：吉林大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號(hào)】：S855.99

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：2591553