發(fā)布時間：2020-03-20 05:34

【摘要】：鴨病毒性肝炎(Duck viral hepatitis,DVH)是一種由鴨的肝炎病毒引起的感染雛鴨的急性高度致死性的疾病。其中,導致該病發(fā)生流行的主要的原因之一為鴨甲肝病毒(Duck hepatitis A virus,DHAV)。它主要感染1-3周齡的雛鴨,死亡率高達90%。DHAV被國際上分為三個主要的血清型:DHAV-1、DHAV-2和DHAV-3,而三種血清型之間幾乎沒有交叉反應(yīng)。DHAV有兩個非編碼區(qū),位于兩端,一個開放型閱讀框(ORF區(qū))位于兩個非編碼區(qū)的中間,最終能夠形成12個成熟的不同類型的蛋白,依次為VP0-VP3-VP1-2A1-2A2-2A3-2B-2C-3A-3B-3C-3D。其中,VP1是衣殼蛋白的主要成分,可刺激機體產(chǎn)生保護性抗體。VP1基因的核苷酸序列是DHAV基因組中的高度可變區(qū),可作為DHAV基因型研究的標記,并可以此序列來區(qū)分病毒的血清型。為了更好地了解山東省濟南市章丘區(qū)DHAV流行情況,自2018年以來,從章丘地區(qū)明水、雙山等8個章丘區(qū)鎮(zhèn)街采集疑似DHAV病料26批次,進行了發(fā)病的情況調(diào)查、病毒的分離鑒定、DHAV VP1基因的研究分析等工作。通過對章丘不同地區(qū)采集的疑似DHAV病例發(fā)病情況調(diào)查顯示,發(fā)病主要集中在4周齡以下的雛鴨,且沒有明顯的季節(jié)性,一年四季均可發(fā)生,其中秋冬兩個季節(jié)發(fā)病率較高。臨床的主要癥狀為:有神經(jīng)癥狀、精神沉郁、頭震顫、站立不穩(wěn)、癱瘓等,死亡的鴨子也會呈現(xiàn)角弓反張癥狀;剖檢發(fā)現(xiàn)肝臟腫大,表面有斑點樣或者針尖狀出血,其他器官也有不同程度地出血。將這26批病料進行病毒檢測,檢測到15批次DHAV病毒為陽性,DHAV的陽性檢出率達到57.7%,其中感染DHAV-1的為5批次,感染DHAV-3的為6批次,DHAV-1和DHAV-3混合感染的為4批次。濟南市章丘區(qū)7個主要養(yǎng)鴨區(qū)域均存在DHAV的流行,多數(shù)區(qū)域存在DHAV-1和DHAV-3的共流行。通過對結(jié)果分析得知,DVH的發(fā)病日齡趨于上升態(tài)勢,且28日齡以上發(fā)病鴨均為DHAV-1和DHAV-3的混合感染。本研究對濟南市章丘區(qū)分離的DHAV陽性毒株進行VP1基因擴增并測序,共得到9株DHAV-1VP1基因核苷酸序列,10株DAHV-3VP1基因核苷酸序列,與NCBI上已經(jīng)登錄的17株DHAV的VP1基因核苷酸序列進行比較,構(gòu)建了相應(yīng)的進化樹進行基因遺傳分析,對DHAV-1和DHAV-3的同源性進行分析比較。結(jié)果顯示,進化樹上DHAV-1和DHAV-3分為兩個明顯的分支。其中9株DHAV-1 VP1基因之間的核苷酸同源性為90.6%-99.9%,與NCBI上登錄的8株DHAV-1毒株的同源性為94.6%-99.9%;10株DHAV-3 VP1基因之間的核苷酸同源性為93.1%-99.9%,與NCBI登錄的9株毒株的同源性為89.3%-99.4%,而且DHAV-3分離株的VP1基因存在明顯的地域性特點。此研究對濟南市章丘區(qū)鴨甲肝病毒流行病學的發(fā)展提供了有效的科學防控措施,同時對治療也提供了理論依據(jù)。
【圖文】：

濟南市章丘區(qū)鴨甲肝病毒的流行病學調(diào)查文庫，但均未能成功。直到 2006 年，臺灣學者根據(jù)小 RNA 病毒的保守區(qū)域設(shè)計多對引物分段擴增，成功得出了多組全基因組序列。隨后研究中發(fā)現(xiàn)對于 DHAV 來說，DHAV-1和 DHAV-3 基因組長度相似，都約為 7700bp 大小，是一條不分節(jié)段的單股正鏈 RNA，結(jié)構(gòu)模式圖如 1-1 所示：

圖 1-1 DHAV 病毒基因組結(jié)構(gòu)示意圖Fig. 1-1 DHAVgenome structure conceptual diagram如圖所示，，DHAV 由四部分組成，5’非編碼區(qū)（untranslated region, UTR），一個的開放閱讀框（open-reading frame, ORF），3’非編碼區(qū)和 poly(A)尾。5’UTR 長約 626沒有帽子結(jié)構(gòu)，含有病毒翻譯起始所必需的內(nèi)部核糖體進入位點。3’UTR 長約 314可形成發(fā)夾結(jié)構(gòu)，poly(A)尾巴在 15～23nt 之間，3’UTR 在 RNA 的復(fù)制過程中起要作用，3’UTR 與病毒的復(fù)制過程相關(guān)這是小 RNA 病毒共同的特征（Rohll et 1995）。一般來說 3’UTR 含有專門負責整個 RNA 復(fù)制起始的順式作用信號（ori Rori R 是一個多區(qū)域、大范圍的結(jié)構(gòu)域，體現(xiàn)在保守的二級結(jié)構(gòu)和三級結(jié)構(gòu)上（Beardal., 2000）。1.2.4.2 DHAV 蛋白的功能DHAV 多聚蛋白具有 11 個可以自行切割的位點，多聚蛋白在翻譯過程中經(jīng)過 3裂解，如圖 1-2 所示：
【學位授予單位】：山東農(nóng)業(yè)大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2019
【分類號】：S858.32

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