【摘要】：脂肪組織對機(jī)體能量代謝和平衡具有重要作用，同時對于動物的肉質(zhì)具有重要影響。肌間脂肪含量是影響牛肉的嫩度、多汁性和口味的重要因素之一。而前體脂肪細(xì)胞是具有增殖和向脂肪細(xì)胞分化能力的特異化細(xì)胞，其增殖和分化會影響脂肪沉積及肌間脂肪含量，，進(jìn)而影響牛肉肉質(zhì)。 研究表明，TNNT1、HBA、HBB、MB、MYLPF、MYL1、PGAM2、MYL6B、HSPB1、TPI、MSRA、TNNI2、TNNT3、TCAP、TXN、PSMA1、GSTM1、COX6B1、VDAC1、GSTP1等基因在不同肌間脂肪沉積情況的牛肉中存在差異表達(dá)。本研究首先分離牛前體脂肪細(xì)胞，誘導(dǎo)其分化為成熟脂肪細(xì)胞，通過油紅O檢測脂類沉積情況，并通過實時熒光定量PCR及Western Blot檢測上述基因在前體脂肪細(xì)胞分化前后的mRNA及蛋白表達(dá)情況。結(jié)果表明，PSMA1、HBB、COX6B1、MYLPF、TPI、PGAM2、HBA、TCAP、GSTP1、MB、TXN、GSTM1、MYL6B、MSRA、HSPB1、TNNT1在前體脂肪細(xì)胞分化后mRNA和蛋白質(zhì)的表達(dá)量上升，而VDAC1、MYL1表達(dá)量下降，TNNI2、TNNT3沒有檢測到表達(dá)。同時，前體脂肪細(xì)胞分化后脂質(zhì)沉積明顯加大，說明這些基因可能在調(diào)節(jié)前體脂肪細(xì)胞分化、脂質(zhì)沉積中具有潛在作用。 隨后，本研究選擇表達(dá)差異較大的PSMA1基因作為研究對象，探求其在牛的前體脂肪細(xì)胞分化及脂質(zhì)沉積的作用。首先將合成的siRNA通過脂質(zhì)體2000轉(zhuǎn)染至前體脂肪細(xì)胞中，特異性敲減PSMA1的表達(dá)，通過油紅O染色、甘油三酯含量檢測及熒光定量PCR法分別檢測脂質(zhì)沉積情況及前體脂肪細(xì)胞分化標(biāo)志基因的表達(dá)情況。結(jié)果表明，PSMA1的低表達(dá)會抑制脂肪細(xì)胞中脂滴形成和聚集，脂肪細(xì)胞甘油三酯累積減少，部分分化標(biāo)志基因表達(dá)量顯著下降。這些結(jié)果對明確前脂肪細(xì)胞分化及脂質(zhì)沉積機(jī)制、為在分子水平上調(diào)控牛脂肪沉積、改善肉質(zhì)提供了理論依據(jù)。
【圖文】：

（3）二抗孵育：取出 NC 膜，室溫下 1×TBST 搖床上漂洗 3 次，每次 5min。同方法稀釋二抗，于室溫?fù)u床孵育2h。室溫下1×TBST漂洗3次，每次10min。（4）將膜放入化學(xué)發(fā)光儀中，在膜表面滴加化學(xué)發(fā)光液，顯影照相，灰度分析。3 實驗結(jié)果.1 分離出牛的前體脂肪細(xì)胞膠原酶消化分離出的腸系膜脂肪組織后，細(xì)胞單個漂浮于培養(yǎng)基中。培養(yǎng) 后有少量細(xì)胞貼壁，如圖 1.1 A，培養(yǎng) 8d 后，細(xì)胞形態(tài)變?yōu)殚L梭形，如圖 1.1

圖 1.2 誘導(dǎo)分化脂肪細(xì)胞油紅 O 染色Figure 1.2 Inducd adipocyte by oil red O staining.3.3 標(biāo)志基因在分化前后表達(dá)情況比較.3.3.1 細(xì)胞總 RNA 提取結(jié)果根據(jù) Trizol 一步法操作步驟，提取分化前后脂肪細(xì)胞 RNA，經(jīng) 1%瓊脂糖膠電泳鑒定，見圖 1.3，圖中無雜帶，28S、18S、5S 三條帶清晰，總 RNA 提比較完整，總 RNA OD260/OD280 比值在 1.8~2.0 之間，且樣品濃度均在00-600ng/μL 之間，可以用于后續(xù)的一系列實驗。
【學(xué)位授予單位】：吉林大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號】：S823

【相似文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前10條

1 曾芳;丘德峰;童雄;徐建;王

本文編號：2587007