發(fā)布時間：2020-03-14 13:27

【摘要】：鉛中毒是一種地球化學性疾病，對肝臟、腎臟等有毒害作用及致癌性，且鉛能夠通過血腦屏障對大腦產(chǎn)生毒害作用，降低學習記憶能力，引起大腦皮質(zhì)和海馬結(jié)構(gòu)損傷，出現(xiàn)病理學改變，但其結(jié)構(gòu)損傷機制不清。為了進一步探究鉛中毒損傷機制，本試驗以昆明小鼠為試驗對象，以醋酸鉛（0、2.4、4.8、9.6mmol/L鉛離子）分別灌胃昆明小鼠進行染毒試驗，染毒周期9d，研究不同濃度醋酸鉛對小鼠大腦組織細胞形態(tài)及細胞內(nèi)微管相關(guān)蛋白MAP2表達的影響。 本試驗利用Bliss法測定小鼠的醋酸鉛半數(shù)致死量，檢測體質(zhì)量、臟器指數(shù)、血鉛水平和病理剖檢以確定動物模型的成功建立；觀察大腦組織神經(jīng)細胞形態(tài)學和細胞超微結(jié)構(gòu)變化；能譜檢測腦細胞細胞核內(nèi)鉛元素的分布；實時熒光定量PCR技術(shù)檢測不同劑量醋酸鉛對大腦皮質(zhì)細胞內(nèi)微管相關(guān)蛋白MAP2mRNA表達的變化；并利用westernblot檢測微管相關(guān)蛋白MAP2的蛋白表達情況。 醋酸鉛急性毒性實驗結(jié)果顯示：醋酸鉛半數(shù)致死量為10562mg/kg，屬于低毒物質(zhì)；小鼠體質(zhì)量隨染毒劑量的增加無明顯變化；與對照組相比，2.4mmol/L組小鼠腎指數(shù)顯著升高（P0.05），4.8mmol/L組和9.6mmol/L組小鼠腎指數(shù)顯著升高（P0.01），腦、心臟、肝臟、脾臟臟器指數(shù)均差異不顯著（P0.05）；剖檢發(fā)現(xiàn)小鼠心臟、脾臟和腎臟腫大，高鉛組尤為嚴重。與對照組相比，染毒組小鼠心肌纖維間隙擴張，肌纖維斷裂，肺泡壁有聚集粘連，肝小葉結(jié)構(gòu)紊亂，肝索排列混亂且有斷裂，竇狀隙擴張，肝細胞大小不均勻，脾臟出血現(xiàn)象明顯，腎臟近曲小管管腔收縮，致密斑數(shù)量增加。 神經(jīng)細胞形態(tài)學實驗結(jié)果顯示：光學顯微鏡觀察，與對照組相比，2.4mmol/L組小鼠大腦組織分子層顆粒細胞和錐體細胞數(shù)量無明顯變化，細胞核位置無異常，細胞形態(tài)變化無顯著差異，4.8mmol/L和9.6mmol/L組小鼠大腦皮層組織顆粒細胞數(shù)量減少，分子層出現(xiàn)斷裂，尤以9.6mmol/L組尤為明顯；透射電鏡觀察：對照組神經(jīng)細胞核膜清晰，線粒體嵴清楚；鉛處理組神經(jīng)細胞線粒體腫脹、染色質(zhì)邊集、核周隙增寬、核膜損壞、線粒體嵴斷裂甚至消失、細胞微管數(shù)量減少、長度縮短且有纏結(jié)現(xiàn)象。 能譜分析結(jié)果表明鉛可以通過血腦屏障，在鉛中毒小鼠神經(jīng)細胞細胞核核孔、染色質(zhì)和核膜位置均檢測出鉛元素，且接觸鉛濃度越高，細胞核內(nèi)鉛元素含量越多。 實時熒光定量PCR實驗結(jié)果顯示：與對照組相比，各鉛攻毒組小鼠大腦細胞中微管相關(guān)蛋白MAP2mRNA的表達量顯著降低（P0.05），，2.4mmol/L，4.8mmol/L和9.6mmol/L組的表達量分別為對照組表達量的0.336、0.347和0.553倍。 Western blot試驗結(jié)果顯示：與對照組相比，鉛中毒小鼠大腦組織中微管相關(guān)蛋白MAP2蛋白表達量降低，且存在劑量依賴關(guān)系，對照組、2.4mmol/L、4.8mmol/L和9.6mmol/L組的灰度值分別為12666.9、8638.0、4471.3和2553.1。 以上結(jié)果表明：高鉛對小鼠大腦組織細胞及細胞內(nèi)微管相關(guān)蛋白MAP2有明顯毒性作用，且存在明顯的劑量依賴性，鉛濃度越高，細胞毒性越大。
【圖文】：

18圖 2-2 醋酸鉛染毒小鼠病理組織學變化A.心臟（×400）；B.肺臟（×400）；C.肝臟（×400）；D.脾臟（×4 00）；E.腎臟（×400）。A1~E1.對照組；A2~E2.低鉛組；A3~E3.中鉛組；A4~E4.高鉛組。Fig.2-2 The histopathological changes of mice exposed to lead acetate A. heart(×400);B. lung(×400);C.liver(×400);D. spleen(×400);E. kidney(×400). A1~E1. represent control groups; A2~E2. represent lowdosage groups; A3~E3. represent median dosage groups; A4~E4. represent high dosage groups.

與對照組（圖A1）相比，2.4 mmol/L（圖A2）組小鼠大腦組織形態(tài)變化無明顯差異，而4.8mmol/L（圖A3）和9.6mmol/L（圖A4）組小鼠大腦組織分子層顆粒細胞和錐體細胞數(shù)量顯著減少，分子層出現(xiàn)大面積斷裂現(xiàn)象，見圖3-1。圖 3-1 醋酸鉛染毒小鼠大腦病理組織學變化（400×）A1：對照組；A2：2.4mmol/L 組；A3：4.8mmol/L 組；A4：9.6mmol/L 組Fig 3-1 The histopathological changes of mice brain exposed to lead acetate(400×)A1:Control group;A2:2.4mmol/L group;A3:4.8mmol/L group;A4:9.6mmol/L group3.3 透射電鏡觀察鉛致神經(jīng)細胞細胞形態(tài)變化結(jié)果顯示：對照組（圖 A）神經(jīng)細胞核核膜清晰，細胞微管纖長整齊，線粒體結(jié)構(gòu)清楚；2.4mmol/L 醋酸鉛組（圖 B）細胞核核膜不規(guī)則，有類似鋸齒形狀凸起；4.8mmol/L醋酸鉛組（圖 C）部分線粒體嵴消失，細胞微管縮短；9.6mmol/L 醋酸鉛組（圖 D）神經(jīng)細胞核膜出現(xiàn)缺口，線粒體膜部分破損，細胞微管短而彎曲且有纏結(jié)趨勢，見圖 3-2。
【學位授予單位】：河南科技學院
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2015
【分類號】：S859.82

【參考文獻】

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本文編號：2586991