【摘要】：瘦素是一種重要的能量調(diào)控因子,存在于人體骨骼肌細(xì)胞,而瘦素在鴨肌肉生長和發(fā)育過程中的作用還不十分清楚。本實驗采用離體培養(yǎng)鴨成肌細(xì)胞、CCK-8、熒光定量PCR等技術(shù),探索瘦素調(diào)控鴨成肌細(xì)胞的增殖和分化機(jī)理。結(jié)果表明:1 ng/mL瘦素促進(jìn)鴨成肌細(xì)胞生長,而10 ng/mL和100 ng/mL顯著抑制成肌細(xì)胞生長(P0.05);瘦素處理24 h后,1 ng/mL組的Myf5和MyoD的表達(dá)量最高,10 ng/mL組的Myf5和100 ng/mL組的MyoD的表達(dá)量最低(P0.05);而MRF4和MyoG在各個濃度處理組的表達(dá)量均顯著下降(P0.05);1 ng/mL瘦素處理24 h后,AMPK和PI3K的表達(dá)量也顯著升高(P0.05),即AMPK和PI3K參與瘦素調(diào)控鴨成肌細(xì)胞生長發(fā)育過程;分別抑制AMPK和PI3K信號通路后,瘦素誘導(dǎo)Myf5和MyoD表達(dá)被減弱(P0.05),而MRF4和MyoG的表達(dá)上升僅在AMPK被抑制組(P0.05)。以上數(shù)據(jù)表明,瘦素可通過激活A(yù)MPK和PI3K信號通路調(diào)控鴨成肌細(xì)胞增殖和分化,但是AMPK信號通路作用性應(yīng)大于PI3K信號通路。
【圖文】：

-52-繁殖生理·ReproductionandPhysiology2017年第53卷第2期且1ng/mL組顯著高于10、100ng/mL組（P<0.05），10ng/mL與100ng/mL組間均沒有顯著差異。因此，瘦素可促進(jìn)鴨成肌細(xì)胞增殖而抑制分化，且具有濃度依賴性，且將1ng/mL作為后續(xù)實驗的處理濃度。2.3瘦素激活A(yù)MPK和PI3K信號通路由圖5可知，1ng/mL瘦素處理鴨成肌細(xì)胞24h后，AMPK和PI3K的表達(dá)量顯著上升（P<0.05），即AMPK和PI3K參與瘦素調(diào)控鴨成肌細(xì)胞發(fā)育過程。2.4抑制AMPK信號通路后瘦素對鴨成肌細(xì)胞增殖量檢測。2.2瘦素對鴨成肌細(xì)胞增殖和分化的影響為了檢測瘦素在鴨成肌細(xì)胞增殖中的作用，本實驗利用不同濃度的外源性瘦素（1、10、100ng/mL）處理細(xì)胞24h。CCK-8檢測結(jié)果顯示，1ng/mL組顯著高于對照組（P<0.05），表明其促進(jìn)成肌細(xì)胞的增殖；而10、100ng/mL組顯著低于對照組（P<0.05），說明其抑制成肌細(xì)胞增殖（圖3）。RT-qPCR檢測瘦素調(diào)節(jié)鴨成肌細(xì)胞增殖與分化關(guān)鍵基因（圖4）。1ng/mL組MyoD和Myf5表達(dá)量顯著高于對照組（P<0.05），，而10、100ng/mL組顯著抑制MyoD和Myf5的表達(dá)。瘦素所有濃度處理組MoyG和MRF4mRNA表達(dá)量均顯著低于對照組（P<0.05），圖1離體培養(yǎng)的鴨成肌細(xì)胞A：培養(yǎng)2h后；B：培養(yǎng)12h圖2鴨成肌細(xì)胞總RNA電泳28s18s5sDO值1.51.00.50圖3不同濃度瘦素處理24h鴨成肌細(xì)胞活性86420對表達(dá)水平相圖5瘦素激活A(yù)MPK和PI3K信號通路對表達(dá)水平相圖4不同濃度瘦素對鴨成肌細(xì)胞增殖與分化關(guān)鍵基因表達(dá)的影響543210

-52-繁殖生理·ReproductionandPhysiology2017年第53卷第2期且1ng/mL組顯著高于10、100ng/mL組（P<0.05），10ng/mL與100ng/mL組間均沒有顯著差異。因此，瘦素可促進(jìn)鴨成肌細(xì)胞增殖而抑制分化，且具有濃度依賴性，且將1ng/mL作為后續(xù)實驗的處理濃度。2.3瘦素激活A(yù)MPK和PI3K信號通路由圖5可知，1ng/mL瘦素處理鴨成肌細(xì)胞24h后，AMPK和PI3K的表達(dá)量顯著上升（P<0.05），即AMPK和PI3K參與瘦素調(diào)控鴨成肌細(xì)胞發(fā)育過程。2.4抑制AMPK信號通路后瘦素對鴨成肌細(xì)胞增殖量檢測。2.2瘦素對鴨成肌細(xì)胞增殖和分化的影響為了檢測瘦素在鴨成肌細(xì)胞增殖中的作用，本實驗利用不同濃度的外源性瘦素（1、10、100ng/mL）處理細(xì)胞24h。CCK-8檢測結(jié)果顯示，1ng/mL組顯著高于對照組（P<0.05），表明其促進(jìn)成肌細(xì)胞的增殖；而10、100ng/mL組顯著低于對照組（P<0.05），說明其抑制成肌細(xì)胞增殖（圖3）。RT-qPCR檢測瘦素調(diào)節(jié)鴨成肌細(xì)胞增殖與分化關(guān)鍵基因（圖4）。1ng/mL組MyoD和Myf5表達(dá)量顯著高于對照組（P<0.05），而10、100ng/mL組顯著抑制MyoD和Myf5的表達(dá)。瘦素所有濃度處理組MoyG和MRF4mRNA表達(dá)量均顯著低于對照組（P<0.05），圖1離體培養(yǎng)的鴨成肌細(xì)胞A：培養(yǎng)2h后；B：培養(yǎng)12h圖2鴨成肌細(xì)胞總RNA電泳28s18s5sDO值1.51.00.50圖3不同濃度瘦素處理24h鴨成肌細(xì)胞活性86420對表達(dá)水平相圖5瘦素激活A(yù)MPK和PI3K信號通路對表達(dá)水平相圖4不同濃度瘦素對鴨成肌細(xì)胞增殖與分化關(guān)鍵基因表達(dá)的影響543210

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本文編號：2584346