【摘要】：為研究牛皰疹病毒Ⅰ型(BH V-1)對體外非免疫細胞——牛胚氣管細胞(EBTr)表達Toll樣受體2(TL R 2)的影響,了解TLR2在BHV-1感染時介導的天然免疫反應機制,本試驗將EBTr細胞分為BHV-1感染組和對照組,分別收集培養(yǎng)后第6、12、18、24及48小時的細胞總RN A和總蛋白,通過熒光定量PCR和W estern-blot技術,檢測感染BHV-1后TLR2在基因和蛋白水平的動態(tài)變化。結果顯示,在第6和12小時,感染組TLR2 m RNA和蛋白的相對表達量均低于對照組;在第48小時,感染組TLR2 m RNA和蛋白的相對表達量均顯著高于對照組(P0.01)。結果表明,BHV-1感染EBTr細胞會影響TLR2 m RNA和蛋白的表達,提示TLR2參與宿主細胞對BHV-1的識別,觸發(fā)天然免疫,這為探索BHV-1感染的免疫機制提供了依據。
【圖文】：

2和β-actin的陽性標準品進行定量PCR擴增，根據不同稀釋濃度的Ct值優(yōu)化最佳檢測范圍，構建各基因的標準曲線。TLR2和β-actin基因的標準曲線在1×102～1×109copies/L范圍內有很好的線性關系，分析獲得兩基因擴增相關系數R2均為1.000，擴增效率E分別為95.81％和92.26％，標準曲線的各項指標均符合定量PCR檢測要求（見圖1和圖2）。2.2BHV-1感染對EBTr細胞TLR2mRNA的影響用SYBRGreenⅠ熒光定量PCR方法同時擴增TLR2和β-actin基因的陽性標準品和3個平行試驗中制備的所有感染組、對照組EBTr細胞cDNA，圖1TLR2熒光定量PCR的標準曲線Fig.1Thestandardcurveofreal-timePCRforTLR2TLR2copies/L循環(huán)數Cyclenumbers324

第3期周偉光等：牛皰疹病毒Ⅰ型感染對牛胚氣管細胞Toll樣受體2表達的影響0.00150.00100.00050.00006122448感染組lnfectiongroup對照組Controlgroup圖3BHV-1感染EBTr細胞后TLR2mRNA的表達變化Fig.3ThemRNAexpressionchangesofTLR2inEBTrcellsafterinfectionwithBHV-1**表示差異極顯著（P＜0.01）**Extremelysignificantdifference（P＜0.01）檢測TLR2和β-actin復制拷貝數。按Insun等［12］的方法，應用雙標準曲線法計算出各檢測樣品TLR2mRNA的相對表達量，利用GraphPadPrism5.02軟件繪制BHV-1感染EBTr細胞后TLR2mRNA的動態(tài)變化柱狀圖（見圖3）。從圖3中可以看出，在第6和第12小時，攻毒組TLR2mRNA的相對表達量均低于對照組，且第6小時的差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.01）；24～48h，攻毒組TLR2mRNA的相對表達量高于對照組，感染第48小時差異極顯著（P＜0.01）。2.3BHV-1感染對EBTr細胞TLR2蛋白表達的影響用Western-blot方法檢測不同時間點感染組和對照組EBTr細胞TLR2和β-actin蛋白的表達量，結果（見圖4）顯示，在蛋白相對分子質量為90及43ku處可見特異性陽性條帶，分別是TLR2及β-actin蛋白表達。計算兩組TLR2蛋白各不同時間點的相對表達量后繪制TLR2蛋白動態(tài)變化柱狀圖。結果（見圖5）顯示，第6和12小時，感染組TLR2蛋白的相對表達量均略低于對照組；24～48h，攻毒組TLR2蛋白的相對表達量顯著高于對照組（P＜0.01）。3討論BHV-1可引起牛的多系統(tǒng)感染，原發(fā)感染時，病毒從破損的皮膚和黏膜進入機體，潛伏在三叉神經節(jié)，隨著宿主細胞DNA的復制而復制，，形成長期潛伏感染的狀態(tài)。當宿主抵抗力下降時，潛伏的病毒被再次激活，導致明顯臨床疾病或亞臨床感染，所以機體需要依賴天然免疫和獲得性免疫反應來防

【相似文獻】

相關期刊論文 前10條

1 李秉鴻;牛皰疹病毒Ⅰ型重組疫苗的免疫原性[J];畜牧獸醫(yī)科技信息;2001年03期

2 陳弟詩;郭萬柱;李雯;陳楊;王小玉;;牛皰疹病毒4研究進展[J];動物醫(yī)學進展;2011年06期

3 蘇雄;;1型牛皰疹病毒疫苗接種防御實驗性呼吸道1型牛皰疹病毒和溶血性巴斯德氏菌感染[J];國外醫(yī)學.生物制品分冊;1983年06期

4 曲新勇;斑點印跡雜交技術測定牛皰疹病毒核酸序列[J];中國獸醫(yī)科技;1988年10期

5 朱其太;一種新的活毒牛皰疹病毒1型疫苗[J];畜牧獸醫(yī)科技信息;1997年09期

6 李凱年;用套式PCR檢測牛皰疹病毒1和5型[J];畜牧獸醫(yī)科技信息;1999年06期

7 Khalid Naeem ,魯國苗;在明尼蘇達州的牛中牛皰疹病毒—4感染和血清抗體陽性率的調查[J];動物檢疫;1990年06期

8 李繼昌,魯成武,殷會成;Ⅰ型牛皰疹病毒活載體疫苗的構建及研究進展[J];東北農業(yè)大學學報;2004年03期

9 霍志云;胡嘉欣;童欽;高維凡;武華;王煒;;Ⅰ型牛皰疹病毒潛伏感染機制研究進展[J];中國人獸共患病學報;2012年01期

10 李繼昌,童光志,張秀英,劉忠貴;牛傳染性鼻氣管炎的生物學診斷與防治[J];中國獸藥雜志;2001年06期

相關會議論文 前2條

1 王曉;丁明孝;翟中和;;牛傳染性鼻氣管炎病毒的繁殖的冰凍蝕刻研究[A];第四次全國電子顯微學會議論文摘要集[C];1986年

2 王冰;張敏敏;鄒新峰;劉正飛;陳煥春;郭愛珍;;牛傳染性鼻氣管炎病毒gG基因PCR檢測方法的建立[A];中國奶業(yè)協(xié)會第26次繁殖學術年會暨國家肉牛牦牛/奶牛產業(yè)技術體系第3屆全國牛病防治學術研討會論文集[C];2011年

相關重要報紙文章 前1條

1 連云港出入境檢驗檢疫局 朱其太;牛皰疹病毒性流產[N];中國畜牧報;2002年

相關博士學位論文 前2條

1 任憲剛;表達O型口蹄疫病毒VP1基因的重組牛皰疹病毒1型的構建及其在兔體內的免疫原性研究[D];中國農業(yè)科學院;2009年

2 王海燕;IBR間接ELISA的建立及重組gE糖蛋白與單抗的研制[D];吉林大學;2006年

相關碩士學位論文 前10條

1 宋先榮;BoHV-5 miR-B10-3p誘餌系統(tǒng)的建立及應用[D];華中農業(yè)大學;2016年

2 吳春濤;牛皰疹病毒Ⅰ型重組抗原的制備及間接ELISA方法的建立[D];山東農業(yè)大學;2006年

3 康真玉;胞質動力蛋白與牛皰疹病毒1型相互作用初步研究[D];華中農業(yè)大學;2012年

4 謝飛;牛皰疹病毒5型糖蛋白基因gG功能研究[D];華中農業(yè)大學;2011年

5 張煒;牛皰疹病毒1型特異編碼的UL0.5基因生物學特性研究[D];華中農業(yè)大學;2012年

6 李艷莉;牛皰疹病毒I型gB基因的單克隆抗體制備及雙抗體夾心ELISA檢測方法的建立[D];揚州大學;2013年

7 王銀;表達牛病毒性腹瀉病毒E2基因的重組I型牛皰疹病毒的構建[D];揚州大學;2013年

8 劉行波;表達兔出血癥病毒VP60蛋白重組牛皰疹病毒的構建及免疫原性分析[D];黑龍江八一農墾大學;2012年

9 伍宜權;偽狂犬病毒及牛皰疹病毒5型的microRNA表達譜研究[D];華中農業(yè)大學;2012年

10 周清;牛皰疹病毒5型編碼的miR-10對其靶基因Us3的調控作用[D];華中農業(yè)大學;2014年

本文編號：2568112