【摘要】：雞(Gallus gallus)白細(xì)胞介素4(interleukin-4,IL-4)是家禽2型輔助性T細(xì)胞(type 2 T helper,Th2)免疫應(yīng)答的重要指示分子,對家禽免疫應(yīng)答、免疫功能分析具有重要作用,由于缺乏有效的檢測工具,關(guān)于雞IL-4(ChIL-4)的研究目前較滯后。為制備具有生物學(xué)活性的重組ChIL-4,本研究采用分子生物學(xué)技術(shù),從實驗室前期構(gòu)建的重組質(zhì)粒p VAX1-ChIL-4中雙酶切獲得ChIL-4基因片段,并將其克隆入桿狀病毒表達(dá)系統(tǒng)的轉(zhuǎn)移載體p Fast Bac1,構(gòu)建重組質(zhì)粒p Fast-ChIL-4,通過位點特異性轉(zhuǎn)座,將ChIL-4基因整合到Bacmid穿梭載體中,構(gòu)建重組質(zhì)粒pBac-ChIL-4并轉(zhuǎn)染草地貪夜蛾細(xì)胞系9(Spodoptera frugiperda,Sf9),進(jìn)行蛋白表達(dá);采用間接免疫熒光法(indirect immunofluorescence,IFA)、間接酶聯(lián)免疫吸附測定(enzymelinked immuno sorbent assay,ELISA)對重組ChIL-4(Bac-ChIL-4)的表達(dá)進(jìn)行分析;采用雞脾臟淋巴細(xì)胞增殖實驗對重組蛋白的生物學(xué)活性進(jìn)行初步分析。實驗結(jié)果表明,重組ChIL-4在桿狀病毒表達(dá)系統(tǒng)中獲得成功表達(dá),轉(zhuǎn)染重組質(zhì)粒Bac-ChIL-4的Sf9細(xì)胞中可見亮綠色熒光;將含有重組蛋白的Sf9細(xì)胞上清濃縮后進(jìn)行間接ELISA檢測,結(jié)果顯示,抗ChIL-4的多抗血清僅識別重組ChIL-4;雞脾臟淋巴細(xì)胞增殖實驗結(jié)果表明,重組ChIL-4能夠刺激雞脾臟淋巴細(xì)胞的增殖,說明該重組蛋白具有較好的生物學(xué)活性。ChIL-4重組蛋白的獲得為其進(jìn)一步開發(fā)應(yīng)用以及功能學(xué)研究提供了重要的生物材料。

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