【摘要】：為了確診豬偽狂犬病病毒(PRV)的感染,探討目前廣西豬群中流行的PRVgE基因的變異特征,為更好地防控豬偽狂犬病(PR)提供參考依據(jù),本研究采集了廣西陸川某豬場保育豬群發(fā)生呼吸道癥狀的肺臟組織,并用Vero細(xì)胞進(jìn)行病毒分離,應(yīng)用PCR方法對分離株的gE基因進(jìn)行克隆和測序,根據(jù)測序結(jié)果證實(shí)分離到1個(gè)PRV毒株,命名為GXLC1。分離株在Vero細(xì)胞上增殖,細(xì)胞出現(xiàn)典型的病變;GXLC1株gE基因與GenBank上20株國內(nèi)外具有代表性參考毒株的核苷酸序列同源性為97.1%~99.4%,氨基酸同源性為94.3%~99.6%;gE基因的遺傳進(jìn)化分析顯示,GXLC1株與2012年的國內(nèi)流行毒株親緣關(guān)系較近,與歐美分離株親緣關(guān)系較遠(yuǎn);氨基酸序列分析顯示,GXLC1株gE蛋白主要抗原表位區(qū)較之國內(nèi)經(jīng)典強(qiáng)毒株有3個(gè)氨基酸位點(diǎn)的變異,可能導(dǎo)致gE抗原性發(fā)生改變。本研究將分離到的1個(gè)PRV毒株進(jìn)行了gE基因的分析,發(fā)現(xiàn)GXLC1株為近年來流行的變異株,gE蛋白在抗原表位區(qū)上有3個(gè)氨基酸位點(diǎn)的變異,這是否會影響GXLC1株毒力和抗原性的變化,還有待進(jìn)一步研究;對gE基因變異特征的分析和病毒的分離為進(jìn)一步豐富廣西PRV的分子流行病學(xué)和疫苗的研制提供參考依據(jù)和重要材料。
【圖文】：

ＰＲＶ接種Ｖｅｒｏ細(xì)胞３６ｈ的細(xì)胞病變Ａ．Ｖｅｒｏｃｅｌｌｃｏｎｔｒｏｌ；Ｂ．Ｔｈｅｃｙｔｏｐａｔｈｉｃｅｆｆｅｃｔｉｎ３６ｈｏｆＰＲＶｉｎｃｕｂａｔｅｄｉｎＶｅｒｏｃｅｌｌｓ圖２Ｖｅｒｏ細(xì)胞３６ｈ細(xì)胞病變觀察結(jié)果（２０×）Ｆｉｇ．２Ｔｈｅｃｙｔｏｐａｔｈｉｃｅｆｆｅｃｔｉｎ３６ｈｏｆＶｅｒｏｃｅｌｌｓ（２０×）Ｍ．ＤＮＡ標(biāo)準(zhǔn)ＤＬ２０００；１～２．ｇＥ基因的擴(kuò)增Ｍ．ＤＮＡＭａｒｋｅｒＤＬ２０００；１－２．ＰＣＲｐｒｏｄｕｃｔｓｏｆｇＥｇｅｎｅ圖３ＧＸＬＣ１株ｇＥ基因的擴(kuò)增Ｆｉｇ．３ＰＣＲａｍｐｌｉｆｉｃａｔｉｏｎｏｆｇＥｇｅｎｅｏｆＧＸＬＣ１２．４ＧＸＬＣ１株ｇＥ基因的同源性比較和進(jìn)化樹ＧＸＬＣ１株ｇＥ基因與ＧｅｎＢａｎｋ上的２０條參考序列進(jìn)行同源性分析結(jié)果顯示ＧＸＬＣ１株ｇＥ基因與２０條參考序列的核苷酸同源性為９７．１％～９９．４％，氨基酸同源性為９４．３％～９９．６％。ＧＸＬＣ１株ｇＥ基因與經(jīng)典強(qiáng)毒Ｍｉｎ－Ａ、Ｒｉｃｅ和ＳＣ的核苷酸同源性分別為９８．７％、９７．２％和９９．０％；氨基酸同源性分別為９７．２％、９４．３％和９７．８％。將ＧＸＬＣ１株ｇＥ基因推導(dǎo)的氨基酸與經(jīng)典強(qiáng)毒株Ｍｉｎ－Ａ株、Ｒｉｃｅ株、ＳＣ和２０１２年國內(nèi)流行毒株（ＧＹ、ＬＧＸ、Ｍ５和ＪＹ分離株）進(jìn)行比對，發(fā)現(xiàn)ＧＸＬＣ１株ｇＥ基因與近期國內(nèi)流行毒株（ＧＹ、ＬＧＸ、Ｍ５和ＪＹ分離株）在第４８和４９６位氨基酸均有１個(gè)天冬氨酸（Ａｓｐ）的９張民秀等：廣西陸川

ＰＲＶ接種Ｖｅｒｏ細(xì)胞３６ｈ的細(xì)胞病變Ａ．Ｖｅｒｏｃｅｌｌｃｏｎｔｒｏｌ；Ｂ．Ｔｈｅｃｙｔｏｐａｔｈｉｃｅｆｆｅｃｔｉｎ３６ｈｏｆＰＲＶｉｎｃｕｂａｔｅｄｉｎＶｅｒｏｃｅｌｌｓ圖２Ｖｅｒｏ細(xì)胞３６ｈ細(xì)胞病變觀察結(jié)果（２０×）Ｆｉｇ．２Ｔｈｅｃｙｔｏｐａｔｈｉｃｅｆｆｅｃｔｉｎ３６ｈｏｆＶｅｒｏｃｅｌｌｓ（２０×）Ｍ．ＤＮＡ標(biāo)準(zhǔn)ＤＬ２０００；１～２．ｇＥ基因的擴(kuò)增Ｍ．ＤＮＡＭａｒｋｅｒＤＬ２０００；１－２．ＰＣＲｐｒｏｄｕｃｔｓｏｆｇＥｇｅｎｅ圖３ＧＸＬＣ１株ｇＥ基因的擴(kuò)增Ｆｉｇ．３ＰＣＲａｍｐｌｉｆｉｃａｔｉｏｎｏｆｇＥｇｅｎｅｏｆＧＸＬＣ１２．４ＧＸＬＣ１株ｇＥ基因的同源性比較和進(jìn)化樹ＧＸＬＣ１株ｇＥ基因與ＧｅｎＢａｎｋ上的２０條參考序列進(jìn)行同源性分析結(jié)果顯示ＧＸＬＣ１株ｇＥ基因與２０條參考序列的核苷酸同源性為９７．１％～９９．４％，氨基酸同源性為９４．３％～９９．６％。ＧＸＬＣ１株ｇＥ基因與經(jīng)典強(qiáng)毒Ｍｉｎ－Ａ、Ｒｉｃｅ和ＳＣ的核苷酸同源性分別為９８．７％、９７．２％和９９．０％；氨基酸同源性分別為９７．２％、９４．３％和９７．８％。將ＧＸＬＣ１株ｇＥ基因推導(dǎo)的氨基酸與經(jīng)典強(qiáng)毒株Ｍｉｎ－Ａ株、Ｒｉｃｅ株、ＳＣ和２０１２年國內(nèi)流行毒株（ＧＹ、ＬＧＸ、Ｍ５和ＪＹ分離株）進(jìn)行比對，發(fā)現(xiàn)ＧＸＬＣ１株ｇＥ基因與近期國內(nèi)流行毒株（ＧＹ、ＬＧＸ、Ｍ５和ＪＹ分離株）在第４８和４９６位氨基酸均有１個(gè)天冬氨酸（Ａｓｐ）的９張民秀等：廣西陸川

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號：2563918