【摘要】：炎癥反應(yīng)是一種常見的有機(jī)體對外來刺激做出防御性反應(yīng)的病理過程。通常,炎癥反應(yīng)作為機(jī)體的一種自動防御系統(tǒng)是有益于機(jī)體的,但是過度性的、失控性的炎癥反應(yīng)會對機(jī)體造成極大的傷害。豬繁殖與呼吸綜合征病毒(PRRSV)感染豬后引起的豬肺損傷主要是因肺部過度的炎癥反應(yīng)所致。目前,對于這種肺損傷尚無有效的治療方法。在炎癥反應(yīng)過程中,大量的中性粒細(xì)胞被肺血管內(nèi)皮捕獲,黏附于內(nèi)皮上,并最終進(jìn)行跨內(nèi)皮遷移、滲出,破壞內(nèi)皮的完整性,導(dǎo)致其滲透性增加而造成肺水腫。細(xì)胞間粘附分子1(ICAM-1)在中性粒細(xì)胞被內(nèi)皮捕獲、遷移、活化并滲出的過程中扮演了十分重要的角色。黏著斑激酶(FAK)能夠介導(dǎo)細(xì)胞黏附和遷移,調(diào)節(jié)黏著斑的翻轉(zhuǎn),并且還參與了內(nèi)皮被破壞后的修復(fù)過程。有研究表明,內(nèi)皮受到傷害時,內(nèi)皮細(xì)胞的遷移明顯增強(qiáng),同時FAK的磷酸化程度顯著提高;當(dāng)阻止FAK的活化后,內(nèi)皮細(xì)胞的遷移也隨之被阻斷。本研究探究了FAK的表達(dá)與炎癥的關(guān)系以及ICAM-1對FAK表達(dá)的調(diào)控,期望為緩解PRRSV感染所致豬肺損傷等過度性炎癥反應(yīng)提供一定的理論基礎(chǔ)。本研究首先檢測了四種炎癥條件下FAK的表達(dá)變化,結(jié)果顯示其顯著增加。然后檢測ICAM-1基因敲除對FAK表達(dá)的影響,發(fā)現(xiàn)FAK的表達(dá)顯著降低。同時,我們發(fā)現(xiàn)ICAM-1基因敲除能夠促進(jìn)miR-15b-5p的表達(dá),且利用生物信息學(xué)軟件預(yù)測發(fā)現(xiàn)miR-15b-5p能夠靶向FAK的3’UTR區(qū)。隨后我們利用雙熒光素酶實(shí)驗證明了miR-15b-5p能夠靶向FAK的3’UTR區(qū)。最后,在細(xì)胞水平超表達(dá)miR-15b-5p,結(jié)果表明超表達(dá)miR-15b-5p能夠抑制FAK的表達(dá)。因此,本研究試驗結(jié)果表明炎癥能夠促進(jìn)FAK的表達(dá)以及ICAM-1能夠通過miR-15b-5p調(diào)控FAK的表達(dá)。
【圖文】：

炎癥環(huán)境下 FAK 的表達(dá)變化1 Poly（I:C）模擬病毒刺激小鼠腦微血管內(nèi)皮細(xì)胞（b.E用 Poly(I:C)刺激 b.End.3 細(xì)胞，在炎癥條件下檢測 FAK的表達(dá)變化，Po度分別為 5.0 μg/ mL、25.0 μg/ mL、50.0 μg/ mL。Poly(I:C)處理細(xì)胞細(xì)胞提取總RNA ，48 h后收細(xì)胞提取總蛋白。分別利用Western blot和 FAK 的表達(dá)，與對照組比較，Poly(I:C)刺激后細(xì)胞中 FAK 的蛋白和 m量均顯著增加（Fig. 3）。隨著 Poly(I:C)濃度的變化，F(xiàn)AK 的蛋白和 m量亦隨之變化。

華中農(nóng)業(yè)大學(xué) 2017 屆碩士研究生學(xué)位論文2 LPS 模擬細(xì)菌刺激小鼠腦微血管內(nèi)皮細(xì)胞（b.End.3）用 LPS 刺激 b.End.3 細(xì)胞，在炎癥條件下檢測 FAK 的表達(dá)變化，LPS別為 0.1 μg/ mL、1.0 μg/ mL、5.0 μg/ mL。LPS 處理細(xì)胞 24 h 后收細(xì)胞NA ，48 h 后收細(xì)胞提取總蛋白。分別利用 Western blot 和 qPCR 檢測達(dá)，，與對照組比較，LPS 刺激后細(xì)胞中 FAK 的蛋白和 mRNA 表達(dá)量均Fig. 4）。隨著 LPS 濃度的變化，F(xiàn)AK 的蛋白和 mRNA 表達(dá)量亦隨之變
【學(xué)位授予單位】：華中農(nóng)業(yè)大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號】：S852.4

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本文編號：2563863