【摘要】：炎癥反應是一種常見的有機體對外來刺激做出防御性反應的病理過程。通常,炎癥反應作為機體的一種自動防御系統(tǒng)是有益于機體的,但是過度性的、失控性的炎癥反應會對機體造成極大的傷害。豬繁殖與呼吸綜合征病毒(PRRSV)感染豬后引起的豬肺損傷主要是因肺部過度的炎癥反應所致。目前,對于這種肺損傷尚無有效的治療方法。在炎癥反應過程中,大量的中性粒細胞被肺血管內皮捕獲,黏附于內皮上,并最終進行跨內皮遷移、滲出,破壞內皮的完整性,導致其滲透性增加而造成肺水腫。細胞間粘附分子1(ICAM-1)在中性粒細胞被內皮捕獲、遷移、活化并滲出的過程中扮演了十分重要的角色。黏著斑激酶(FAK)能夠介導細胞黏附和遷移,調節(jié)黏著斑的翻轉,并且還參與了內皮被破壞后的修復過程。有研究表明,內皮受到傷害時,內皮細胞的遷移明顯增強,同時FAK的磷酸化程度顯著提高;當阻止FAK的活化后,內皮細胞的遷移也隨之被阻斷。本研究探究了FAK的表達與炎癥的關系以及ICAM-1對FAK表達的調控,期望為緩解PRRSV感染所致豬肺損傷等過度性炎癥反應提供一定的理論基礎。本研究首先檢測了四種炎癥條件下FAK的表達變化,結果顯示其顯著增加。然后檢測ICAM-1基因敲除對FAK表達的影響,發(fā)現(xiàn)FAK的表達顯著降低。同時,我們發(fā)現(xiàn)ICAM-1基因敲除能夠促進miR-15b-5p的表達,且利用生物信息學軟件預測發(fā)現(xiàn)miR-15b-5p能夠靶向FAK的3’UTR區(qū)。隨后我們利用雙熒光素酶實驗證明了miR-15b-5p能夠靶向FAK的3’UTR區(qū)。最后,在細胞水平超表達miR-15b-5p,結果表明超表達miR-15b-5p能夠抑制FAK的表達。因此,本研究試驗結果表明炎癥能夠促進FAK的表達以及ICAM-1能夠通過miR-15b-5p調控FAK的表達。
【圖文】：

炎癥環(huán)境下 FAK 的表達變化1 Poly（I:C）模擬病毒刺激小鼠腦微血管內皮細胞（b.E用 Poly(I:C)刺激 b.End.3 細胞，在炎癥條件下檢測 FAK的表達變化，Po度分別為 5.0 μg/ mL、25.0 μg/ mL、50.0 μg/ mL。Poly(I:C)處理細胞細胞提取總RNA ，48 h后收細胞提取總蛋白。分別利用Western blot和 FAK 的表達，與對照組比較，Poly(I:C)刺激后細胞中 FAK 的蛋白和 m量均顯著增加（Fig. 3）。隨著 Poly(I:C)濃度的變化，F(xiàn)AK 的蛋白和 m量亦隨之變化。

華中農業(yè)大學 2017 屆碩士研究生學位論文2 LPS 模擬細菌刺激小鼠腦微血管內皮細胞（b.End.3）用 LPS 刺激 b.End.3 細胞，在炎癥條件下檢測 FAK 的表達變化，LPS別為 0.1 μg/ mL、1.0 μg/ mL、5.0 μg/ mL。LPS 處理細胞 24 h 后收細胞NA ，48 h 后收細胞提取總蛋白。分別利用 Western blot 和 qPCR 檢測達，，與對照組比較，LPS 刺激后細胞中 FAK 的蛋白和 mRNA 表達量均Fig. 4）。隨著 LPS 濃度的變化，F(xiàn)AK 的蛋白和 mRNA 表達量亦隨之變
【學位授予單位】：華中農業(yè)大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2017
【分類號】：S852.4

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本文編號：2563863