發(fā)布時(shí)間：2019-11-05 12:47

【摘要】：【目的】分離篩選適于在獺兔腸道中存活并定殖的高黏附性乳酸菌株�！痉椒ā客ㄟ^(guò)乳酸菌選擇性培養(yǎng)基從5和10日齡哺乳獺兔腸黏膜中分離具有抑制大腸桿菌活性的菌株,經(jīng)16SrRNA基因序列分析進(jìn)行鑒定,并檢測(cè)其耐人工胃液、耐膽鹽及黏附特性、表面疏水性等益生特性�！窘Y(jié)果】分離篩選出3株具有較強(qiáng)抑制大腸桿菌活性的菌株,分別鑒定為短乳桿菌(L1)、植物乳桿菌(L2)、干酪乳桿菌(L3),其抑菌活性大小為L(zhǎng)3L2L1。3株菌株均能耐受pH=4.0的人工胃液;在pH=3.0人工胃液中,L2和L3的活菌含量未出現(xiàn)明顯變化(P0.05),而L1的活菌含量顯著下降(P0.05);3株菌株在pH=2.0和pH=1.8人工胃液中的活菌含量均顯著降低(P0.01)。L1和L2均能耐受2.0g/L膽鹽;雖然L1和L2在3.0g/L膽鹽中的活菌量出現(xiàn)極顯著(P0.01)和顯著(P0.05)下降,但二者仍保留較高活菌含量;膽鹽對(duì)L3的存活有明顯抑制作用,隨著膽鹽含量的升高,L3的活菌含量極顯著降低(P0.01)。L2和L3對(duì)黏蛋白的黏附率無(wú)顯著差異(P0.05),均顯著高于L1(P0.05)。L3的表面疏水性最高,L2次之,二者之間無(wú)顯著差異(P0.05);L1的表面疏水性低于L2(P=0.092),顯著低于L3(P0.05)�！窘Y(jié)論】分離所獲得的3株乳桿菌均具備益生菌特性,其中以植物乳桿菌L2最佳。
【圖文】：

℃３０ｓ，５５℃９０ｓ，７２℃３０ｓ，３５個(gè)循環(huán)；７２℃２ｍｉｎ；４℃保存。試驗(yàn)設(shè)空白對(duì)照，以ｄｄＨ２Ｏ代替模板進(jìn)行擴(kuò)增。ＰＣＲ擴(kuò)增產(chǎn)物經(jīng)１０ｇ／Ｌ瓊脂糖凝膠電泳檢測(cè)后，用Ａｘｙｇｅｎ核酸純化試劑盒純化回收，送至上海生工生物工程股份有限公司進(jìn)行測(cè)序。將１６ＳｒＲＮＡ基因測(cè)序結(jié)果提交到ＧｅｎＢａｎｋ，使用Ｂｌａｓｔ程序與ＧｅｎＢａｎｋ數(shù)據(jù)庫(kù)中的乳酸菌１６ＳｒＲＮＡ序列進(jìn)行同源性比較和菌種鑒定。用ＭＥＧＡ５．１０軟件分析所測(cè)菌株序列和其他與乳酸菌屬（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ）同源性較高菌種的１６ＳｒＲＮＡ基因序列，構(gòu)建系統(tǒng)發(fā)育樹。１．５分離菌株對(duì)人工胃液和膽鹽的耐受性檢測(cè)分離菌株的人工胃液（ＳＥＳ）耐受性檢測(cè)參考Ｇａｒｃíａ－Ｒｕｉｚ等［１０］的方法進(jìn)行。取細(xì)菌含量為１０８～１０９ＣＦＵ／ｍＬ的各菌株新鮮懸浮液與含６ｇ／Ｌ胃蛋白酶的無(wú)菌電解質(zhì)溶液（０．４４ｇ／ＬＣａＣｌ２，１２．４ｇ／ＬＮａＣｌ，４．４ｇ／ＬＫＣｌ，，２．４ｇ／ＬＮａＨＣＯ３）等體積混合。為模擬菌株從食管入胃的環(huán)境特點(diǎn)，各菌株每培養(yǎng)２０ｍｉｎ后立即用１ｍｏｌ／ＬＨＣｌ調(diào)整混合培養(yǎng)液的ｐＨ值，由起始ｐＨ＝６．２逐步降低為５．０，４．０，３．０，２．０；最后調(diào)整混合培養(yǎng)液ｐＨ值為１．８，培養(yǎng)３０ｍｉｎ。分別在培養(yǎng)２０，４０，６０，８０，１００和１３０ｍｉｎ采集各菌株培養(yǎng)液，用平板計(jì)數(shù)法測(cè)定各菌株在連續(xù)不同ｐＨ值培養(yǎng)條件下的活菌含量。將各分離菌株的新鮮懸浮液（菌含量為１０

℃３０ｓ，５５℃９０ｓ，７２℃３０ｓ，３５個(gè)循環(huán)；７２℃２ｍｉｎ；４℃保存。試驗(yàn)設(shè)空白對(duì)照，以ｄｄＨ２Ｏ代替模板進(jìn)行擴(kuò)增。ＰＣＲ擴(kuò)增產(chǎn)物經(jīng)１０ｇ／Ｌ瓊脂糖凝膠電泳檢測(cè)后，用Ａｘｙｇｅｎ核酸純化試劑盒純化回收，送至上海生工生物工程股份有限公司進(jìn)行測(cè)序。將１６ＳｒＲＮＡ基因測(cè)序結(jié)果提交到ＧｅｎＢａｎｋ，使用Ｂｌａｓｔ程序與ＧｅｎＢａｎｋ數(shù)據(jù)庫(kù)中的乳酸菌１６ＳｒＲＮＡ序列進(jìn)行同源性比較和菌種鑒定。用ＭＥＧＡ５．１０軟件分析所測(cè)菌株序列和其他與乳酸菌屬（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ）同源性較高菌種的１６ＳｒＲＮＡ基因序列，構(gòu)建系統(tǒng)發(fā)育樹。１．５分離菌株對(duì)人工胃液和膽鹽的耐受性檢測(cè)分離菌株的人工胃液（ＳＥＳ）耐受性檢測(cè)參考Ｇａｒｃíａ－Ｒｕｉｚ等［１０］的方法進(jìn)行。取細(xì)菌含量為１０８～１０９ＣＦＵ／ｍＬ的各菌株新鮮懸浮液與含６ｇ／Ｌ胃蛋白酶的無(wú)菌電解質(zhì)溶液（０．４４ｇ／ＬＣａＣｌ２，１２．４ｇ／ＬＮａＣｌ，４．４ｇ／ＬＫＣｌ，２．４ｇ／ＬＮａＨＣＯ３）等體積混合。為模擬菌株從食管入胃的環(huán)境特點(diǎn)，各菌株每培養(yǎng)２０ｍｉｎ后立即用１ｍｏｌ／ＬＨＣｌ調(diào)整混合培養(yǎng)液的ｐＨ值，由起始ｐＨ＝６．２逐步降低為５．０，４．０，３．０，２．０；最后調(diào)整混合培養(yǎng)液ｐＨ值為１．８，培養(yǎng)３０ｍｉｎ。分別在培養(yǎng)２０，４０，６０，８０，１００和１３０ｍｉｎ采集各菌株培養(yǎng)液，用平板計(jì)數(shù)法測(cè)定各菌株在連續(xù)不同ｐＨ值培養(yǎng)條件下的活菌含量。將各分離菌株的新鮮懸浮液（菌含量為１０


本文編號(hào)：2556186