【摘要】：雞傳染性支氣管炎病毒(Infectious bronchitis virus, IBV)侵害雞群,給養(yǎng)禽業(yè)造成了重大的經(jīng)濟(jì)損失。不同國家、地區(qū)流行的IBV存在差異,因此及時(shí)掌握本地區(qū)現(xiàn)場流行毒株基因的變異乃至抗原性的變化,對(duì)該病的防控和疫苗的研發(fā)都非常重要。為進(jìn)一步了解近年廣西IBV流行株的遺傳變異情況和為新疫苗的研發(fā)提供依據(jù),本課題對(duì)2012～2013年的廣西IBV分離株進(jìn)行了如下基因序列分析和血清學(xué)鑒定。首先,通過RT-PCR的方法對(duì)2012～2013年從廣西從免疫失敗的雞群中分離鑒定的15株IBV分離株基因組3’端的S-N基因區(qū)段(包含S1、S2、3a、3b、E、M、5a、5b和N基因)進(jìn)行擴(kuò)增、測序,應(yīng)用生物學(xué)軟件進(jìn)行相似性分析、進(jìn)化樹分析和重組分析,用在線軟件進(jìn)行O-糖基化位點(diǎn)和正向選擇位點(diǎn)分析。序列測定結(jié)果顯示各分離株的S-N基因區(qū)段片段長度為6767 bp～6939 bp。與常用的疫苗株H120以及國內(nèi)外參考株比較,大部分毒株的S1基因廣泛存在氨基酸的缺失、替代以及插入現(xiàn)象,其它各基因片段只存在氨基酸的替代。氨基酸進(jìn)化樹表明,各基因在進(jìn)化樹上不完全平行。重組分析結(jié)果顯示GX-NN130048的S1基因具有重組現(xiàn)象,來源于LX4型野毒株與疫苗株4/91的重組。O-糖基化位點(diǎn)結(jié)果顯示15株IBV分離株的N蛋白都有糖基化位點(diǎn)且位點(diǎn)數(shù)量最多為21～28個(gè)。正向壓力檢測結(jié)果表明,S1蛋白的aa308位置存在正向選擇位點(diǎn)。以上結(jié)果表明15株IBV分離株九個(gè)基因已不同程度的發(fā)生變異。其次,測定2012～2013年15株IBV分離株的TOC-ID50,利用本課題組已鑒定出7種不同血清型的單因子血清與15株IBV分離株氣管環(huán)上進(jìn)行中和試驗(yàn)。結(jié)果顯示15株IBV分離株可分為7不同的血清型。GX-NN 130048、GX-YL 13080630、GX-YL 130806200和GX-NN130059屬于血清1型;GX-NN120091和X-QZ131126屬于血清2型;GX-YL130025屬于血清3型；GX-NN 120079禹于血清4型；GX-NN 120084、GX-NN 120089和GX-QZ130065屬于血清5型；GX-NN 130003、GX-QZ 130064和GX-NN 130067屬于血清6型；GX-NN 130021屬于血清7型。重組毒株GX-NN 130048的血清型不同于疫苗株H120和4/91。結(jié)果表明了近年廣西仍然存在多種血清型。此外,本研究對(duì)2012～2013年的15個(gè)IBV分離株的血清型和基于四種基因(S1、E、M、N)分型的相關(guān)性進(jìn)行分析。結(jié)果發(fā)現(xiàn),基于S1基因序列的基因分析和血清分型之間符合率為66.7%(10/15),而基于其它基因的符合率均為46.7%(7/15)。由此可知,基于S1基因序列的基因分型比基于E、M和N基因序列所做的基因分型與血清分型之間的符合率要高些。本研究表明,近年廣西地區(qū)IBV不管是在基因型還是血清型上都發(fā)生了明顯的變異,且出現(xiàn)了疫苗株和優(yōu)勢流行株的重組現(xiàn)象,這可能導(dǎo)致免疫失敗的主要原因。本研究為更全面闡述IBV變異規(guī)律和分子機(jī)制以及為新疫苗的研發(fā)提供依據(jù)。
【圖文】：

應(yīng)用ＲＴ－ＰＣ民的方法對(duì)１５株舊Ｖ分離株的３’端１／３處序列Ｓ－Ｎ基因區(qū)段，，包含Ｓ１、逡逑Ｓ２、３ａ、３ｂ、Ｅ、Ｍ、５ａ、５ｂ、Ｎ基因進(jìn)行擴(kuò)增。結(jié)果表明所有的毒株都獲得了逡逑特異性的目的條帶，結(jié)果見圖２－１邋（ａ、ｂ、Ｃ、ｄ、ｅ和ｆ，分別為表２－２中６對(duì)引物ＰＫ逡逑Ｐ２、Ｐ３、Ｐ４、Ｐ５和Ｐ６所擴(kuò)增出來的ＰＣ艮產(chǎn)物）。逡逑Ｍ邋ｉ邋２邋５邐４邋５邐６邋７邐８邋９邋１０邋１１邋１２邋Ｕ邋Ｕ邋１５邋Ｉｔ邋Ｍ邐：邐Ｊ邋ｆ邋ｆ邋７邋Ｓ邋？邋ＩＣ邋１１邋１：邋Ｉ？邋１４邋１５邋Ｉｊ邋Ｍ逡逑去已弓穿┣卞澹澹澹蟈危鵞xＩ＇邋’sE？—－二…畝品運(yùn)逡逑ｈＣＬｋ＊邋，１，１，逡逑Ｍ邋１邋２邋？邋４邋Ｊ邋５邋７邋ｓ邋９＊１０邋ＩＩ邋１２邋１３邋Ｈ邋１５邋Ｍ邐Ｍ邋１邋：邋５邋４邋ｊ邋６邋；邋６邋弓巧邋Ｕ邋Ｕ邋ｉ５邋ｊ４邋Ｉ；邋｝0邋Ｍ逡逑曲著鴻德V/：Ｖ－１逡逑’~栧�，佩逦ｄ辶x希駑澹澹簀澹�。＂’’，ｈp澹沖澹ㄥ澹。�、，逦冲Ｓ邋２邋_澹村澹靛澹跺澹峰澹稿搴澹族澹鑠澹保哄澹　�！邋Ｈ邋Ｕ邋化邋沉x希邋危駑義賢跡玻卞危抖砸锏拿瘢裕校妹癲锏纈窘峁ǎ�、ｂ、ｃ、ｄ、ｅ、偐辶x希停哄澹模蹋玻埃埃板澹停幔耄澹潁哄澹保保擔(dān)哄澹保抵昃桑值牡纈窘峁�；１６ｉu跣遠(yuǎn)哉斟義希疲椋紓玻卞澹牛歟澹悖簦潁錚穡瑁錚潁澹螅椋簀澹潁澹笊劍簦簀澹錚駑迕瘢裕校茫義澹穡潁錚洌酰悖簦簀澹錚駑澹跺澹穡幔椋潁簀澹錚駑澹穡潁椋恚澹潁簀澹ǎ�，邋ｂ，邋ｃ，ｄ，邋ｅ，偐辶x希停哄澹模蹋玻埃埃板澹停幔耄澹潁哄澹保保擔(dān)哄澹遙裕校妹皴澹穡潁錚洌酰悖簦簀

本文編號(hào)：2541647