【摘要】：腸道菌群是維持動物腸道機能穩(wěn)定以及正常免疫功能的基礎(chǔ),對宿主的健康具有重要的意義。高脂肪含量日糧能使機體產(chǎn)生過多的自由基,并產(chǎn)生氧化應(yīng)激,引起血脂異常,腸道菌群紊亂,嚴重影響著動物機體健康和生產(chǎn)性能。本研究是在體外發(fā)酵試驗的基礎(chǔ)上,在改良GAM基礎(chǔ)培養(yǎng)基中添加適量H2O2,建立氧化應(yīng)激模型,并研究精氨酸(Arginine)、半胱氨酸(Cysteine)和谷氨酰胺(Glutamine)對發(fā)酵液中乳酸菌和大腸桿菌含量的影響。通過在大鼠高脂日糧中添加Cys和Gln,研究其對氧化應(yīng)激條件下腸道主要細菌含量、部分血液和組織抗氧化指標及體脂肪含量的影響,為進一步研究腸道菌群與功能性氨基酸提供理論依據(jù)。試驗設(shè)計分四部分,第一部分為大鼠腸道全菌群體外發(fā)酵試驗,試驗分7組,對照組,及分別在GAM基礎(chǔ)培養(yǎng)基中添加0.6%和1.2%的Arg、Cys及Gln的試驗組,每組設(shè)3個重復,每個重復GAM培養(yǎng)基為25 ml,分別在發(fā)酵0、6、12、24 h后,檢測其pH、乳酸菌、雙歧桿菌、大腸桿菌、丁酸菌含量;第二部分為構(gòu)建氧化應(yīng)激模型,試驗分6組,分別在GAM基礎(chǔ)培養(yǎng)基中添加0.5、1、2、4、5 mM的H2O2,在發(fā)酵0 h、6 h、12 h、24 h檢測發(fā)酵液中乳酸菌、大腸桿菌的數(shù)量,確定適宜的H2O2濃度;第三部分為Arg、Cys及Gln對氧化應(yīng)激模式下發(fā)酵液中乳酸菌、大腸桿菌含量影響,試驗分8組,每組3個重復,分別為腸道全菌培養(yǎng)基對照組(GAM)、腸道全菌培養(yǎng)基+2 mM過氧化氫即陰性對照組、在陰性對照基礎(chǔ)上添加0.6%、1.2%的Arg、Cys及Gln處理組,篩選出影響顯著的處理組用于后續(xù)試驗;第四部分為Cys及Gln對高脂日糧大鼠腸道主要細菌含量和血液及組織中抗氧化指標影響試驗,選擇條件一致的8-12周齡,體重240-350 g清潔級SD大鼠60只(公、母各半),利用完全隨機試驗設(shè)計分為6組,分別為正常日糧對照組、高脂日糧組、在高脂日糧基礎(chǔ)上添加0.6%、1.2%的Cys組和Gln組。結(jié)果表明:1.在GAM基礎(chǔ)培養(yǎng)基中添加不同濃度的Arg、Cys及Gln,對乳酸菌、雙歧桿菌、大腸桿菌、丁酸菌的含量及pH均有不同程度的影響(p0.05);2.構(gòu)建體外氧化應(yīng)激模型的H2O2最適宜濃度為2 mM;3.與對照組相比,GAM基礎(chǔ)培養(yǎng)基中加入2 mM H2O2后,發(fā)酵液中乳酸菌、大腸桿菌含量顯著降低(p0.05),添加不同濃度Arg、Cys及Gln后,乳酸菌和大腸桿菌含量均顯著高于H2O2組(p0.05),但與GAM對照組的差異不顯著(p0.05);4.高脂日糧組的大鼠各段腸道內(nèi)的乳酸菌、雙歧桿菌數(shù)量均顯著低于正常日糧組(P0.05),而大腸桿菌和丁酸菌含量高于正常日糧組。添加Cys、Gln組可以使大鼠腸道的這四種菌數(shù)量恢復到正常水平;5.高脂日糧組大鼠血液、各段腸組織的ROS、SOD、MDA、T-AOC水平顯著高于正常組(P0.05),添加Cys和Gln試驗組的ROS、SOD、MDA、T-AOC水平顯著低于高脂組(P0.05),但與正常組無差異,且添加的濃度越高ROS、SOD、MDA、T-AOC水平降低越明顯;6.高脂日糧組大鼠脾臟和派伊爾結(jié)中內(nèi)毒素含量均顯著高于正常值(P0.05),添加1.2%Cys組的值顯著降低(P0.05),并與正常組內(nèi)毒素水平相接近;7.高脂日糧組大鼠TG、TC、LDL-C均顯著高于正常組(P0.05),引起高脂血癥。添加Cys、Gln試驗組各項指標顯著低于高脂組(P0.05),添加Gln組效果沒有Cys組明顯。8.高脂日糧添加Cys和Gln組的體脂肪含量顯著低于高脂組,與對照組沒有差異,以添加Cys組脂肪含量最低。綜合研究結(jié)果可以看出,在高脂日糧中添加Cys、Gln,可以增加腸道內(nèi)的乳酸菌、雙歧桿菌水平,降低大腸桿菌水平,提高血液和腸組織中ROS、SOD、MDA、T-AOC等抗氧化指標的水平,降低血液TG、TC、LDL-C的水平,減少脾臟和派伊爾結(jié)中內(nèi)毒素含量。達到降低體脂,使所有指標恢復到正常水平,消除氧化應(yīng)激的目的。
【學位授予單位】：黑龍江八一農(nóng)墾大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2015
【分類號】：S816

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