【摘要】：益生菌具有無毒、無殘留、抗菌效果顯著等特點(diǎn),是綠色的抗生素替代物。其中芽孢桿菌具有耐高溫、耐酸堿、抗逆性強(qiáng)、加工簡單的特點(diǎn),成為益生菌研究的重點(diǎn)。本課題以健康仔豬的新鮮糞便為樣品,篩選出一株對病源指示菌有抗性的芽孢桿菌,進(jìn)行了鑒定和條件優(yōu)化,并對菌株的抗菌活性進(jìn)行了初步研究,主要結(jié)果如下：通過革蘭氏染色和芽孢染色的方法,從豬糞中篩選出37株芽孢桿菌,其中有11株對大腸桿菌和金黃色葡萄球菌具有較強(qiáng)抑制效果,并對這11株菌對豬膽鹽、人工胃液、人工腸液和硫酸銅的耐受力進(jìn)行了試驗(yàn),考查了11株菌淀粉酶、蛋白酶、纖維酶的分泌能力。試驗(yàn)結(jié)果顯示,豬腸源性芽孢桿菌對膽鹽和人工消化液有較好的耐受性；微量元素銅離子對芽孢桿菌的增殖有抑制作用；芽孢桿菌都能產(chǎn)生淀粉酶,但是產(chǎn)纖維素酶和蛋白酶都不明顯。從中挑選耐受性及產(chǎn)酶能力都比較好的一株YB5進(jìn)行生理生化及16S rDNA序列分析,鑒定為枯草芽孢桿菌。對枯草芽孢桿菌YB5的發(fā)酵進(jìn)行了研究優(yōu)化,提高了菌體生物量和芽孢生成率。通過單因素試驗(yàn)確定的最優(yōu)發(fā)酵培養(yǎng)基為：葡萄糖2%,蛋白胨1%,硫酸鎂0.02%,氯化鈣0.02%,磷酸氫二鉀：磷酸二氫鉀為0.2：0.05(%)。通過單因素試驗(yàn)和正交試驗(yàn)確定最優(yōu)發(fā)酵條件為：初始pH值為7,接種量7%,培養(yǎng)溫度37℃,搖床轉(zhuǎn)速150r/min。在優(yōu)化條件下,YB5活菌數(shù)由2.03×109cfu/ml增長到3.83×109cfu/ml,提高了89%,芽孢形成率從77%提高到96%,較優(yōu)化前提高了25%。以金黃色葡萄球菌為指示菌,對發(fā)酵液中抗菌物質(zhì)的性質(zhì)進(jìn)行了初步研究。將發(fā)酵液離心上清液在不同溫度下處理考查其抗菌活性,結(jié)果表明：40℃-70℃處理時(shí),抑菌性沒有明顯變化,處理溫度高于80℃抑菌性隨著處理溫度的升高而逐漸降低,121℃處理后,抑菌活性幾乎消失。酸堿和有機(jī)溶劑處理后,上清液的抑菌活性有所下降。上清液對蛋白酶比較敏感,用胃蛋白酶、胰蛋白酶、木瓜蛋白酶處理1h時(shí),抑菌活性幾乎消失。通過以上結(jié)果,可以初步判定枯草芽孢桿菌YB5產(chǎn)生的抑菌活性物質(zhì)為蛋白類物質(zhì)。
【圖文】：

對大腸桿菌的最大抑菌圈達(dá)１４．８３ｍｍ，對金黃色葡萄球菌的最大抑菌圈達(dá)逡逑１５．００ｍｍ，，對兩種指示菌都有較好抑制作用（抑菌圈直徑均含１０ｍｍ）的菌株有逡逑ＹＢ１、ＹＢ５和ＹＢ７，圖２．１，２．２顯示的是菌株對指示菌（金黃色葡萄球菌和大逡逑腸桿菌）的抑制作用。逡逑表２．２芽抱桿茵對致巧菌的抑茵圈直徑逡逑Ｔａｂｌｅ邋２．２邋Ｉｎｈ化ｉｔｉｏｎ邋ｚｏｎｅ邋ｏｆ邋ｐａ化ｏｇｅｎｉｃ邋ｂａｃ化ｒｉａ邋ｂｙ邋另３。７／始逡逑菌株邋人腸桿茵抑菌曖直輯（ｍｍ）邐金

本文編號：2526417