【摘要】：β-防御素是抗菌肽分子家族中重要一員,廣泛存在于禽類(lèi)以及哺乳動(dòng)物多種器官的黏膜上皮組織。作為機(jī)體的首道免疫防線(xiàn),β-防御素生物學(xué)活性廣泛,能直接殺死病原菌,具有廣譜抗菌性、抗病毒、抗細(xì)胞毒性及調(diào)節(jié)免疫等作用,是動(dòng)物機(jī)體抵御病原微生物侵襲的有效天然屏障。當(dāng)下作為抗生素的替代品,在預(yù)防和治療動(dòng)物炎癥方面炙手可熱,有望成為新型抗感染藥物。本文主要通過(guò)基因工程的方法對(duì)綿羊β-防御素成熟肽msBD-1進(jìn)行構(gòu)建,并進(jìn)行原核表達(dá)及蛋白純化。為表達(dá)綿羊-β防御素-1成熟肽(msBD-1)蛋白,本研究根據(jù)GenBank中公布的msBD-1序列在兩端加上酶切位點(diǎn)BamHI和XhoI,進(jìn)行密碼子優(yōu)化后,借助PCR技術(shù)來(lái)擴(kuò)增得到目的片段msBD-1并克隆到載體pGEX-4T-1中,先后由菌液PCR、雙酶切以及序列測(cè)定,證實(shí)目的片段克隆成功。進(jìn)一步將重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)化到transB(DE3)感受態(tài)細(xì)胞中,經(jīng)IPTG誘導(dǎo)后,高效融合表達(dá)msBD-1蛋白。為增加蛋白的表達(dá)量,實(shí)驗(yàn)通過(guò)改變IPTG的誘導(dǎo)濃度和誘導(dǎo)時(shí)間,確定出蛋白表達(dá)的最佳誘導(dǎo)條件。同時(shí),經(jīng)Western Blot分析得出重組蛋白能和GST標(biāo)簽抗體產(chǎn)生特異性反應(yīng)。結(jié)果顯示成功表達(dá)出msBD-1蛋白,并對(duì)msBD-1蛋白進(jìn)行純化。
【圖文】：

１邋ａ－防御素逡逑－防御素主要遍布于人、豬及鼠類(lèi)的嗜中性粒細(xì)胞，在兔的齒Ｗ及人類(lèi)、咕齒類(lèi)的小腸潘氏細(xì)胞中也有部分存在。成熟的ａ－有２９￣３６個(gè)氨基酸殘基。ａ－防御素的前體大致由８７？９７個(gè)氨組成，這些殘基包括氨基木端的信號(hào)r饋⑶捌魏蚹夯徑私羲嫫浜蟮鬧罩姑藶胱櫻ⅲⅰ＞舜毆艙裱芯恐な擔(dān)幔烙氐模車(chē)牧臃絞椒直鷂茫螅歟茫螅�、Ｃｙｓ２－Ｃｙｓ５A(chǔ)ⅲ茫螅常茫螅�。不Ｃｙｓ６将Ｎ端和Ｃ墩f(shuō)陌胄舶彼嵯嗔煞腫喲蠡罰ⅲ�。徏样仿斖樄有利又G泵鵯秩牖宓牟≡澹�，避免蛋白脳U�，Ｗ维持定性。哉嗏疫碟X詵矯媯幔烙賾性鑾烤尥儐赴檀弊饔玫鬧苯佑氪卟《玖Ｗ詠岷隙鸚Аｅ義

本文編號(hào)：2524565