【摘要】：豆?fàn)钅椅豺什∈怯啥範(fàn)顜Ы{蟲(chóng)的幼蟲(chóng)—豆?fàn)钅椅豺室鸬囊环N危害較為嚴(yán)重的寄生蟲(chóng)病。本研究在前期工作的基礎(chǔ)上,選擇兔豆?fàn)顜Ы{蟲(chóng)六鉤蚴的特異性抗原—TPO18抗原,制備單克隆抗體和多克隆抗體,對(duì)其不同發(fā)育階段進(jìn)行進(jìn)行定位,以闡明該抗原的來(lái)源,為確定宿主保護(hù)性靶抗原和侵襲力、抵抗力的關(guān)系奠定基礎(chǔ)。1.采用人工感染試驗(yàn),建立了豆?fàn)钅椅豺始彝酶腥灸Ｊ健＝Y(jié)果表明犬體內(nèi)成蟲(chóng)的存活率平均為92%,豆?fàn)钅椅豺矢腥炯彝玫母腥韭蕿?2.03%。研究結(jié)果為進(jìn)一步探究豆?fàn)钅椅豺什〉闹虏C(jī)制及免疫防治奠定了基礎(chǔ)。2.用IPTG誘導(dǎo)TPO18重組質(zhì)粒,成功對(duì)其進(jìn)行了高效表達(dá);用層析法純化可溶性GST-TPO18蛋白,表達(dá)產(chǎn)物經(jīng)SDS-PADE分析,表明該重組抗原的分子量約為38 ku,和預(yù)期大小相同。用自然感染豆?fàn)钅椅豺赎?yáng)性血清進(jìn)行Western-blot試驗(yàn),證明該抗原具有良好的反應(yīng)原性。3.用純化后的TPO18重組抗原免疫新西蘭兔成功制備該蛋白的多克隆抗體。Western-blot檢測(cè)了其反應(yīng)原性。結(jié)果表明,用制備的兔多克隆抗體反應(yīng)原性良好,能滿足后續(xù)實(shí)驗(yàn)的要求。4.純化的TPO18重組抗原以弗氏完全佐劑與不完全佐劑乳化,對(duì)BALB/c小鼠進(jìn)行了系列免疫后,采取小鼠的脾細(xì)胞與SP2/0細(xì)胞融合得到雜交瘤細(xì)胞,經(jīng)重組抗原和GST抗原雙系統(tǒng)間接ELISA篩選,獲取20株陽(yáng)性雜交瘤細(xì)胞,采用有限稀釋法進(jìn)行3次亞克隆,最終獲得三株單克隆細(xì)胞株。小鼠腹腔接種雜交瘤細(xì)胞獲取相應(yīng)的腹水,成功得到了TPO18單克隆抗體,并對(duì)其進(jìn)行了相關(guān)分析和檢驗(yàn)。結(jié)果表明,檢測(cè)腹水效價(jià)為1，

本文編號(hào)：2524583