【摘要】：背景Sonic Hedgehog (Shh)是一種分泌性蛋白,在細(xì)胞增殖分化,形態(tài)建成,軸突導(dǎo)向等方面均具有重要作用。Shh在雞胚脊索和脊髓底板表達(dá),并向四周擴(kuò)散,其所形成的濃度梯度控制脊髓背腹軸的形成。并通過結(jié)合不同受體吸引或排斥脊髓聯(lián)合神經(jīng)元軸突導(dǎo)向,使不同神經(jīng)元間形成正確的連接,形成復(fù)雜的神經(jīng)網(wǎng)絡(luò)。研究Shh的功能,有助于更好的理解神經(jīng)系統(tǒng)發(fā)育機(jī)制。目的1.研究雞胚脊髓不同部位聯(lián)合神經(jīng)元纖維向?qū)?cè)喙部與尾部投射的偏好性以及喙部與尾部投射量的比值是否有統(tǒng)計學(xué)差異。2.研究Shh在雞胚脊髓中超表達(dá)后對聯(lián)合神經(jīng)元軸突向?qū)?cè)投射的影響。3.研究雞胚發(fā)育過程中轉(zhuǎn)錄因子Pax (Paired box) 3、Pax6、Pax7、神經(jīng)鈣黏蛋白(N-Cadherin, N-Cdh)、鈣黏蛋白6(Cadherin6, Cdh6)與鈣黏蛋白7(Cadherin7, Cdh7)在雞胚脊髓中的表達(dá)模式。4.研究雞胚發(fā)育過程中,Shh在脊髓中超表達(dá)后對Pax基因家族Pax3、Pax6與Pax7蛋白表達(dá)以及Cdh7 mRNA表達(dá)的影響。方法1.在E3時,利用雞胚脊髓活體電轉(zhuǎn)基因技術(shù)將pCAGGS-GFP質(zhì)粒分別轉(zhuǎn)入雞胚頸部、前肢、胸部前段、胸部后段和后肢五個部位,E6-E6.5時取GFP陽性胚胎進(jìn)行Open Book,用ImageJ對投射纖維進(jìn)行灰度分析,SPSS統(tǒng)計分析聯(lián)合神經(jīng)元纖維向?qū)?cè)喙部與尾部投射的偏好性以及喙部與尾部投射量的比值是否有統(tǒng)計學(xué)差異。2.在E2.5-E3時,對照組,利用雞胚脊髓活體電轉(zhuǎn)基因技術(shù)將pCAGGS-GFP質(zhì)粒轉(zhuǎn)入雞胚脊髓一側(cè)；實驗組則將攜帶Shh基因的表達(dá)質(zhì)粒pCAGGS-Shh和pCAGGS-GFP質(zhì)粒共轉(zhuǎn)入雞胚脊髓一側(cè),E6時取材切片,熒光免疫組織化學(xué)技術(shù)檢測Shh是否發(fā)生超表達(dá),利用Open Book技術(shù)研究Shh在雞胚脊髓中超表達(dá)后對聯(lián)合神經(jīng)元軸突投射的影響。3.取雞胚正常發(fā)育過程E3-E6、E8和E10時期的脊髓,每個時期至少取3個材料,固定、脫水、包埋、冷凍切片后,熒光免疫組織化學(xué)技術(shù)研究E4-E6時期Pax3, Pax6以及Pax7蛋白表達(dá)情況,并用原位雜交法檢測：N-Cdh. Cdh6與Cdh7在雞胚脊髓發(fā)育過程中的時空表達(dá)模式。4.在雞胚E2.5～E3時,實驗組,利用雞胚脊髓活體電轉(zhuǎn)將pCAGGS-Shh和pCAGGS-GFP質(zhì)粒共轉(zhuǎn)入雞胚脊髓一側(cè),對照組則只轉(zhuǎn)入報告基因質(zhì)粒。E4-E6時分別取材,原位雜交檢測Shh是否真正超表達(dá),超表達(dá)后研究對Pax3、Pax6、Pax7以及Cdh7的影響。最后用ImageJ軟件對對照組及實驗組中四種基因在脊髓兩側(cè)的表達(dá)進(jìn)行灰度分析,并利用SPSS統(tǒng)計分析對照組和實驗組中脊髓兩側(cè)Pax3、Pax6、Pax7及Cdh7的表達(dá)量是否存在統(tǒng)計學(xué)差異。結(jié)果1.所研究的雞胚脊髓的5個部位中,大多數(shù)聯(lián)合神經(jīng)元軸突穿越底板后均向喙部投射,少數(shù)向尾部投射。除頸部與前肢的聯(lián)合神經(jīng)元纖維向?qū)?cè)喙部與尾部投射的比值之間無統(tǒng)計學(xué)差異外(P0.05),五個部位兩兩之間均存在極顯著統(tǒng)計學(xué)差異(P001)。2.在脊髓組織切片水平上,熒光免疫組織化學(xué)結(jié)果表明,Shh在雞胚脊髓中成功超表達(dá),無論在組織切片上還是通過Open Book技術(shù)進(jìn)行觀察,與對照組相比,’超表達(dá)后轉(zhuǎn)染側(cè)神經(jīng)纖維都無法正常通過底板投射到對側(cè)。3.熒光免疫組織化學(xué)結(jié)果表明E4-E6期間,Pax3主要表達(dá)于脊髓翼板,生皮肌節(jié),背根以及背根神經(jīng)節(jié)；Pax6主要表達(dá)于跨越翼板和基板的脊髓中間部位；Pax7則主要表達(dá)于翼板、頂板和生皮肌節(jié)。原位雜交結(jié)果表明,雞胚發(fā)育早期,Cdh7主要在生皮肌節(jié)、底板、基板背部、運動柱、背根和腹根強烈表達(dá),E8-E10,其表達(dá)主要集中在灰質(zhì)區(qū)、背根神經(jīng)節(jié)和腹根。4.原位雜交結(jié)果表明,利用雞胚脊髓活體電轉(zhuǎn)基因技術(shù)成功建立了Shh超表達(dá)模型。免疫熒光和原位雜交結(jié)果表明,Shh超表達(dá)后,脊髓轉(zhuǎn)染側(cè)與未轉(zhuǎn)染側(cè)相比Pax3、Pax6、Pax7以及Cdh7的表達(dá)量均存在極顯著差異(P0.01),這四種基因在脊髓中的表達(dá)均被抑制。結(jié)論1.雞胚脊髓不同部位聯(lián)合神經(jīng)元軸突向?qū)?cè)喙部與尾部的投射有差異。2.Shh是一種軸突導(dǎo)向分子,雞胚脊髓中Shh超表達(dá)抑制脊髓聯(lián)合神經(jīng)元軸突向?qū)?cè)投射。3.雞胚發(fā)育過程中,Pax3、Pax6、Pax7、V-Cdh、Cdh6與Cdh7不同的表達(dá)模式預(yù)示著它們在雞胚脊髓及其周圍組織發(fā)育過程中扮演不同角色。4. Pax3、Pax6、Pax7和Cdh7在雞胚脊髓中的表達(dá)均受Shh信號通路調(diào)控。
[Abstract]:......
【學(xué)位授予單位】：新鄉(xiāng)醫(yī)學(xué)院
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號】：S831

【相似文獻(xiàn)】

相關(guān)會議論文 前5條

1 唐蘭芳;杜立中;;新生大鼠高氧肺損傷sonic hedgehog表達(dá)升高[A];2007年浙江省兒科學(xué)、小兒外科學(xué)學(xué)術(shù)年會論文匯編[C];2007年

2 周家喜;賈莉瑋;劉為敏;劉爽;曹宇靜;段恩奎;;Sonic hedgehog維持人胎兒表皮中干細(xì)胞增殖的潛在作用[A];第十屆全國生殖生物學(xué)學(xué)術(shù)研討會論文摘要集[C];2005年

3 唐蘭芳;杜立中;;新生大鼠高氧肺損傷sonic hedgehog表達(dá)升高[A];2006（第三屆）江浙滬兒科學(xué)術(shù)會議暨浙江省兒科學(xué)術(shù)年會論文匯編[C];2006年

4 柴宗濤;王文權(quán);孔令群;王龍蓉;朱小東;孫惠川;;Sonic hedgehog在肝細(xì)胞癌中的表達(dá)及其預(yù)后價值[A];第九屆全國腫瘤轉(zhuǎn)移學(xué)術(shù)大會暨2011年黑龍江省醫(yī)學(xué)會腫瘤學(xué)年會摘要集[C];2011年

5 賈萬健;李炯明;丁建東;劉建和;陳戩;姜永明;張勁松;王光;張海燕;;Sonic Hedgehog信號通路在前列腺癌中作用的研究[A];第十五屆全國泌尿外科學(xué)術(shù)會議論文集[C];2008年

相關(guān)博士學(xué)位論文 前3條

1 林媛;Sonic hedgehog在牙胚發(fā)育中的作用[D];第四軍醫(yī)大學(xué);2004年

2 夏遠(yuǎn)鵬;Sonic hedgehog(Shh)對大鼠永久性腦缺血的潛在治療作用及機(jī)制研究[D];華中科技大學(xué);2012年

3 夏遠(yuǎn)鵬;Sonic hedgehog （Shh）對大鼠永久性腦缺血的潛在治療作用及機(jī)制研究[D];華中科技大學(xué);2012年

相關(guān)碩士學(xué)位論文 前5條

1 李晗;雞胚發(fā)育過程中Sonic Hedgehog超表達(dá)對脊髓聯(lián)合神經(jīng)元軸突投射及相關(guān)蛋白表達(dá)影響[D];新鄉(xiāng)醫(yī)學(xué)院;2015年

2 肖青;氧化應(yīng)激對乳鼠心肌細(xì)胞Sonic hedgehog表達(dá)的影響以及小鼠急性心肌梗塞模型的制備[D];廣州醫(yī)學(xué)院;2009年

3 盧光;牦牛胚胎裙毛毛囊形態(tài)發(fā)生及其β-catenin和Sonic hedgehog的表達(dá)規(guī)律[D];西北農(nóng)林科技大學(xué);2010年

4 張治軍;Sonic Hedgehog在胃癌中的表達(dá)[D];山西醫(yī)科大學(xué);2007年

5 丁建東;Sonic Hedgehog信號通路在前列腺癌中作用的研究[D];昆明醫(yī)學(xué)院;2008年

，

本文編號：2500569