發(fā)布時(shí)間：2019-05-27 20:57

【摘要】：【目的】研究高非酯化脂肪酸(NEFA)對(duì)體外培養(yǎng)奶牛肝細(xì)胞的氧化應(yīng)激狀態(tài)、氧化抗氧化酶活性及mRNA表達(dá)的影響�！痉椒ā糠蛛x奶牛肝細(xì)胞,培養(yǎng)72h后,添加不同濃度(0.0,0.3,0.6,1.2和2.4mmol/L)的NEFA繼續(xù)培養(yǎng)12,24和36h,采用酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(ELISA)法,檢測(cè)過(guò)氧化氫(H2O2)、丙二醛(MDA)含量及總抗氧化能力(TAC)、羥自由基抑制能力和超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽過(guò)氧化物酶(GSH-Px)、過(guò)氧化氫酶(CAT)的活性,實(shí)時(shí)熒光定量PCR(qRT-PCR)法檢測(cè)GSH-Px、SOD、CAT基因mRNA的相對(duì)表達(dá)量�！窘Y(jié)果】隨著NEFA濃度的增加,添加NEFA 12,24和36h時(shí),各處理組肝細(xì)胞中H2O2和MDA含量增加,TAC含量、SOD、GSH-Px、CAT的活性以及羥自由基抑制能力降低。與對(duì)照組相比,添加NEFA 12和36h時(shí),SOD mRNA相對(duì)表達(dá)量均隨NEFA濃度的增加呈劑量依賴(lài)性降低;添加NEFA 24h時(shí),0.6,1.2和2.4mmol/L NEFA處理組的SOD mRNA相對(duì)表達(dá)量均極顯著降低(P0.01)。添加NEFA 12h時(shí),各濃度NEFA處理組GSH-Px mRNA相對(duì)表達(dá)量均極顯著降低(P0.01);添加NEFA 24h時(shí),1.2和2.4mmol/L NEFA處理組的GSH-Px mRNA相對(duì)表達(dá)量均極顯著降低(P0.01),0.6mmol/L NEFA處理組的GSH-Px mRNA相對(duì)表達(dá)量顯著降低(P0.05);添加NEFA 36h時(shí),GSH-Px mRNA相對(duì)表達(dá)量隨NEFA濃度的增加呈劑量依賴(lài)性降低。添加NEFA 12h時(shí),0.6和2.4mmol/L NEFA處理組的CAT mRNA相對(duì)表達(dá)量均極顯著降低(P0.01);添加NEFA 24和36h時(shí),CAT mRNA相對(duì)表達(dá)量呈劑量依賴(lài)性降低�！窘Y(jié)論】NEFA誘導(dǎo)體外培養(yǎng)的奶牛肝細(xì)胞發(fā)生氧化還原失衡,尤其以高濃度NEFA誘導(dǎo)的氧化應(yīng)激更為嚴(yán)重。
[Abstract]:[objective] to study the effects of high non-esterified fatty acid (NEFA) on oxidative stress, oxidative antioxidant enzyme activity and mRNA expression in bovine hepatocytes cultured in vitro. [methods] Dairy cow hepatocytes were isolated and cultured for 72 hours. NEFA with different concentrations (0.0, 0.3, 0.6, 1.2 and 2.4mmol/L) was cultured for 12, 24 and 36 hours. Hydrogen peroxide (H2O2), malondialdehyde (MDA) (MDA) content and total antioxidant capacity (TAC),) were detected by enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA). The inhibitory ability of hydroxyl radical and the activities of GSH-Px and catalase (CAT) in (SOD), were detected by real-time fluorescence quantitative PCR (qRT-PCR). [results] with the increase of NEFA concentration, the contents of H2O2 and MDA in hepatocytes increased, while the content of TAC, the activity of SOD,GSH-Px,CAT and the inhibitory ability of hydroxyl radical decreased at 24 h and 36 h after the addition of NEFA. [results] with the increase of NEFA concentration, the content of H2O2 and MDA in hepatocytes increased, while the activity of SOD,GSH-Px,CAT and the inhibitory ability of hydroxyl radical decreased. Compared with the control group, the relative expression of, SOD mRNA decreased in a dose-dependent manner with the increase of NEFA concentration at 12 h and 36 h after the addition of NEFA. When NEFA was added for 24 h, the relative expression of SOD mRNA in 0.6, 1.2 and 2.4mmol/L NEFA treatment groups decreased significantly (P 0.01). When NEFA was added for 12 h, the relative expression of GSH-Px mRNA in each concentration of NEFA treatment group was significantly decreased (P 0.01). When NEFA was added for 24 h, the relative expression of GSH-Px mRNA in GSH-Px mRNA treatment group and 2.4mmol/L NEFA treatment group was significantly lower than that in 0.6mmol/L NEFA treatment group (P 0.01), and the relative expression of GSH-Px mRNA in 0.6mmol/L NEFA treatment group was significantly lower than that in 0.6mmol/L NEFA treatment group (P 0.05). When NEFA was added for 36 h, the relative expression of GSH-Px mRNA decreased in a dose-dependent manner with the increase of NEFA concentration. When NEFA was added for 12 h, the relative expression of CAT mRNA in 2.4mmol/L NEFA treatment group and 2.4mmol/L NEFA treatment group was significantly lower than that in 2.4mmol/L NEFA treatment group (P 0.01). When NEFA was added for 24 h and 36 h, the relative expression of, CAT mRNA decreased in a dose-dependent manner. [conclusion] NEFA induced redox imbalance in dairy cow hepatocytes in vitro, especially the oxidative stress induced by high concentration of NEFA.
【作者單位】： 安徽農(nóng)業(yè)大學(xué)動(dòng)物科技學(xué)院;吉林大學(xué)動(dòng)物醫(yī)學(xué)學(xué)院;
【基金】：國(guó)家自然科學(xué)基金項(xiàng)目(31502136) 安徽省自然科學(xué)基金項(xiàng)目(1608085QC56) 安徽農(nóng)業(yè)大學(xué)青年科學(xué)基金重點(diǎn)項(xiàng)目(2014zr008);安徽農(nóng)業(yè)大學(xué)穩(wěn)定和引進(jìn)人才科研項(xiàng)目(yj2015-14) 安徽省現(xiàn)代農(nóng)業(yè)產(chǎn)業(yè)技術(shù)體系項(xiàng)目(2016-2020)
【分類(lèi)號(hào)】：S823

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本文編號(hào)：2486472