【摘要】：日本血吸蟲病是人獸共患,嚴(yán)重的危害了人類和動物健康。雖然,我國血吸蟲病的防控取得了舉世矚目的成就,但是隨著近來氣候變暖、生態(tài)和經(jīng)濟(jì)社會等因素的變化,血吸蟲病防控又面臨諸多新的挑戰(zhàn)。為了更好的控制血吸蟲病,需要利用現(xiàn)代分子生物技術(shù)系統(tǒng)研究血吸蟲病原生物學(xué),深入揭示血吸蟲感染和寄生蟲的分子機(jī)理,開拓血吸蟲病防控的新途徑。本論文主要研究了感染了日本血吸蟲后終末宿主體內(nèi)循環(huán)性microRNAs的變化,主要分為以下兩方面:1)感染日本血吸蟲宿主體內(nèi)循環(huán)micro RNAs(Circulating microRNAs)序列測定以及靶基因功能預(yù)測分析;2)qRT-PCR驗(yàn)證分析。具體如下:一、利用生物信息學(xué)方法對獲得小RNAs序列進(jìn)行系統(tǒng)分析,鑒定與血吸蟲感染相關(guān)的循環(huán)性miRNAs并預(yù)測其功能。在本研究中,兩次生物學(xué)重復(fù)實(shí)驗(yàn)中共發(fā)現(xiàn)173條miRNAs差異表達(dá)。進(jìn)一步分析表明感染后有64個已知miRNAs在P1和P2呈現(xiàn)差異表達(dá)(差異倍數(shù)在兩倍以上),其中12個下調(diào),52個上調(diào)。將P1與P2(P1:感染后14、28天后大白兔血漿所建的庫;P2:感染后10、14、28、32天后大白兔血漿所建的庫)分別與未感染的家兔血漿小RNA庫進(jìn)行比對,獲得感染后特有的小RNAs并進(jìn)行分類分析。對未注釋的特異性的小RNA進(jìn)行新miRNAs預(yù)測,結(jié)果表明P1有191條新miRNAs,P2中有190條新miRNAs。對感染后宿主特異性表達(dá)的循環(huán)miRNAs以人的數(shù)據(jù)庫為參考進(jìn)行靶基因預(yù)測,結(jié)果表明在124個miRNAs中按照最嚴(yán)謹(jǐn)?shù)臈l件(只考慮五個軟件都能預(yù)測到的靶基因),我們共獲得了18個miRNAs以及它們所調(diào)控的共416條靶基因。用David數(shù)據(jù)庫提供的在線工具Pather進(jìn)行了靶基因GO聚類分析,結(jié)果表明主要參與包括細(xì)胞進(jìn)程、代謝調(diào)控、生命調(diào)控、發(fā)育進(jìn)程等生物學(xué)進(jìn)程。分子功能分析表明主要參與結(jié)合、催化活性等分子功能。KEGG代謝調(diào)控分析表明,這些miRNAs主要與信號調(diào)節(jié)通路相關(guān)如有13個靶基因參與了整聯(lián)素信號通路,9個參與了p53通路,8個參與了促性腺釋放激素受體通路等二,q-RT PCR驗(yàn)證分析。選取了10個差異表達(dá)的microRNAs進(jìn)一步利用實(shí)時定量PCR進(jìn)行驗(yàn)證分析,結(jié)果表明所選取的10個miRNAs表達(dá)與Solex測序結(jié)果一致。其中miR-10在感染日本血吸蟲的新西蘭大白兔的血漿中是上調(diào)的,而miR-10的上調(diào)與某些癌癥相關(guān),因此我們的結(jié)果對進(jìn)一步探索miR-10在宿主與日本血吸蟲的相互作用打下了基礎(chǔ)。
[Abstract]:......
【學(xué)位授予單位】：中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號】：S855.9

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本文編號：2464821