發(fā)布時(shí)間：2019-03-31 08:39

【摘要】：肺泡Ⅱ型上皮細(xì)胞(alveolar epithelial typeⅡcell)是構(gòu)成哺乳類(lèi)動(dòng)物肺泡上皮的主要細(xì)胞之一,是合成和分泌肺泡表面活性物質(zhì)的主要細(xì)胞。肺泡Ⅱ型上皮細(xì)胞(AECⅡ)幾乎為所有肺臟細(xì)胞的始祖。豬繁殖與呼吸綜合征病毒(Porcine reproductive and respiratory syndromevirus,PRRSV)是一種具有囊膜、單股正鏈的RNA病毒,分類(lèi)于動(dòng)脈炎病毒科、動(dòng)脈炎病毒屬,是豬繁殖和呼吸系統(tǒng)障礙綜合征(PRRS)的病原體。PRRSV感染的主要細(xì)胞是免疫系統(tǒng)的巨噬細(xì)胞、淋巴細(xì)胞。在肺臟中,PRRSV感染的靶細(xì)胞PAM為公認(rèn)的首選研究對(duì)象,而PRRSV感染PAECⅡ的研究仍顯薄弱。本實(shí)驗(yàn)通過(guò)灌洗仔豬肺臟然后使用免疫粘附法分離純化PAECⅡ,通過(guò)堿性磷酸酶染色及電鏡觀察確定PAECⅡ的純度。最后以HP-PRRSV感染PAECⅡ作為研究對(duì)象,檢測(cè)感染后不同時(shí)間點(diǎn)細(xì)胞內(nèi)PRRSV的N蛋白變化,探究HP-PRRSV能否感染PAECⅡ。研究結(jié)果如下:1.通過(guò)肺灌洗及彈性蛋白酶消化法分離PAECⅡ,然后采用免疫粘附法進(jìn)一步對(duì)PAECⅡ進(jìn)行純化,利用堿性磷酸酶染色及透射電鏡對(duì)其進(jìn)行純度及特征的確定。結(jié)果顯示,彈性蛋白酶消化和IgG粘附可以產(chǎn)生較高純度的PAECⅡ,電鏡下可以觀察到PAECⅡ表面有微絨毛,細(xì)胞內(nèi)有其特異性結(jié)構(gòu)板層小體,說(shuō)明所分離的細(xì)胞是PAECⅡ細(xì)胞。2.HP-PRRSV感染PAECⅡ后分別對(duì)0h,12h,24h的細(xì)胞進(jìn)行間接免疫熒光實(shí)驗(yàn)和western blot實(shí)驗(yàn)。間接免疫熒光實(shí)驗(yàn)在12h,24h檢測(cè)到細(xì)胞內(nèi)有綠色熒光,western blot實(shí)驗(yàn)在12h,24h均有PRRSV的N蛋白表達(dá)。通過(guò)間接免疫熒光實(shí)驗(yàn)和western blot實(shí)驗(yàn)證實(shí)HP-PRRSV能夠感染PAECⅡ。
[Abstract]:Alveolar type 鈪，

本文編號(hào)：2450746