【摘要】：異氟醚是臨床常用的吸入麻醉劑,越來(lái)越多的研究發(fā)現(xiàn)異氟醚可誘發(fā)快速生長(zhǎng)發(fā)育期動(dòng)物的大腦神經(jīng)元異常凋亡,并伴隨有腦功能的長(zhǎng)期損害。本課題組多年來(lái)一直致力于異氟醚神經(jīng)毒性方面的研究,在異氟醚引發(fā)幼鼠行為學(xué)改變、誘導(dǎo)神經(jīng)細(xì)胞凋亡等方面獲得了較多的實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)。近期又發(fā)現(xiàn)異氟醚在誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡的同時(shí)伴有自噬現(xiàn)象發(fā)生。自噬和凋亡的復(fù)雜關(guān)系是當(dāng)今研究領(lǐng)域的一個(gè)熱點(diǎn)問(wèn)題,明確自噬在異氟醚誘導(dǎo)的神經(jīng)細(xì)胞凋亡中的作用及相關(guān)機(jī)制,將為進(jìn)一步探討麻醉毒性及其機(jī)制提供理論基礎(chǔ)。因此本試驗(yàn)以7日齡Sprague-Dawley(SD)大鼠為研究對(duì)象,結(jié)合自噬工具藥的運(yùn)用,明確自噬在異氟醚致幼鼠海馬凋亡中的作用,并初步探討異氟醚引起的凋亡與自噬之間的關(guān)系。試驗(yàn)選取120只7日齡SD大鼠,隨機(jī)分為異氟醚(Isoflurane)麻醉組(ISO)、雷帕霉素(rapamycin,RAP)干預(yù)組(ISO+RAP)和3-甲基嘌呤(3-methyladenine,3-MA)干預(yù)組(ISO+3-MA)。ISO+RAP組和ISO+3-MA組在麻醉前30 min分別腹腔注射20 mg/kg RAP和20 mg/kg 3-MA。各組大鼠分別吸入1.5%異氟醚混合60%氧氣0 h(CON)、2 h、3 h、4 h和6 h,CON組只吸入60%氧氣6 h。采用蘇木精-伊紅(HE)染色、原位末端標(biāo)記法(TUNEL)染色、免疫組化和蛋白印跡法(Western blot)等技術(shù),從組織學(xué)和分子學(xué)角度探討異氟醚誘導(dǎo)的自噬和凋亡之間的關(guān)系。試驗(yàn)結(jié)果如下:HE染色發(fā)現(xiàn),對(duì)照組海馬各區(qū)神經(jīng)細(xì)胞元排列緊密,少有凋亡;ISO組在麻醉3 h后出現(xiàn)較明顯凋亡;ISO+RAP組在麻醉4 h后出現(xiàn)較明顯凋亡;ISO+3-MA組在各麻醉時(shí)間點(diǎn)均出現(xiàn)不同程度凋亡,在麻醉4 h和6 h時(shí)尤為嚴(yán)重。TUNEL染色顯示:與對(duì)照組比,ISO組在麻醉3 h后凋亡明顯增加;ISO+3-MA組在麻醉2 h后均有明顯凋亡;ISO+RAP組僅在麻醉4 h和6 h時(shí)有明顯凋亡。組間比較,ISO+RAP組在麻醉4 h(P0.05)和6 h(P0.05)時(shí)較ISO組細(xì)胞凋亡率顯著降低;ISO+3-MA組在麻醉2 h(P0.05)、3 h(P0.05)和4 h(P0.05)時(shí)較ISO組細(xì)胞凋亡率顯著增多。Cleaved-caspase-3蛋白印跡結(jié)果與TUNEL染色結(jié)果基本一致。LC-3 II免疫組化顯示:與對(duì)照組相比,ISO組在麻醉3 h時(shí)陽(yáng)性細(xì)胞比率較多;ISO+3-MA組LC-3 II陽(yáng)性細(xì)胞比率較低,但在麻醉6 h時(shí)明顯增加;ISO+RAP組則在麻醉3 h和4 h時(shí)有較多陽(yáng)性細(xì)胞表達(dá)。LC-3 II蛋白結(jié)果顯示:與對(duì)照組相比,ISO組在麻醉3 h后表達(dá)量顯著增加;ISO+3-MA組在各麻醉時(shí)間點(diǎn)均無(wú)顯著變化;ISO+RAP組在麻醉2 h、3 h和4 h時(shí)顯著升高。組間比較,ISO+RAP組在麻醉2 h時(shí)表達(dá)量明顯高于ISO組(P0.05),在麻醉2 h(P0.05)和3 h(P0.05)時(shí)顯著高于ISO+3-MA組。Beclin-1變化趨勢(shì)與LC-3 II基本一致。Bcl-2蛋白印跡結(jié)果顯示:與對(duì)照組相比,ISO組和ISO+3-MA組在麻醉3 h后均有顯著下降;ISO+RAP組僅在麻醉4 h和6 h時(shí)顯著下降。組間相比,ISO組和ISO+3-MA組在麻醉3 h(P0.05,P0.05),4 h(P0.05,P0.05)和6 h(P0.05,P0.05)時(shí)均顯著低于ISO+RAP組;在麻醉2 h時(shí),ISO+3-MA組Bcl-2表達(dá)量顯著低于ISO+RAP組(P0.05)和ISO組(P0.05)。本試驗(yàn)結(jié)果顯示,1.5%異氟醚可誘發(fā)7日齡SD大鼠海馬神經(jīng)元發(fā)生自噬和凋亡,且自噬的出現(xiàn)早于凋亡。異氟醚誘導(dǎo)的神經(jīng)細(xì)胞自噬對(duì)細(xì)胞凋亡有抑制作用,即異氟醚誘導(dǎo)的海馬神經(jīng)元自噬可降低其神經(jīng)毒性,起到保護(hù)細(xì)胞作用。抑制自噬能加重異氟醚誘導(dǎo)的幼鼠海馬神經(jīng)元凋亡,而促進(jìn)自噬能減輕異氟醚誘導(dǎo)的幼鼠海馬神經(jīng)元凋亡。
[Abstract]:......
【學(xué)位授予單位】：東北農(nóng)業(yè)大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號(hào)】：S859.7

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：2423528