發(fā)布時(shí)間：2019-01-30 19:30

【摘要】：為掌握雞細(xì)胞中應(yīng)激顆粒(stress granules,SGs)形成機(jī)制,以及雞GTP酶激活蛋白SH3功能區(qū)結(jié)合蛋白1(G3BP1)在新城疫病毒(NDV)感染誘導(dǎo)SG形成過(guò)程中的作用,用NDV感染HeLa細(xì)胞,免疫熒光試驗(yàn)檢測(cè)內(nèi)源性G3BP1的定位,外源轉(zhuǎn)染雞G3BP1和各分段結(jié)構(gòu)域,以不同應(yīng)激處理之后觀察與內(nèi)源性SG標(biāo)志物共定位現(xiàn)象,最后轉(zhuǎn)染G3BP1之后感染NDV,以Western blot和TCID50檢測(cè)病毒復(fù)制情況。結(jié)果顯示:NDV感染能夠誘導(dǎo)內(nèi)源性G3BP1聚集形成SG,將雞G3BP1分別轉(zhuǎn)染至HeLa、DF-1和CEF后,以不同應(yīng)激處理之后均能在細(xì)胞中觀察到SG。將雞G3BP1不同結(jié)構(gòu)域分別轉(zhuǎn)染HeLa細(xì)胞,以氧化應(yīng)激和NDV分別處理,結(jié)果顯示G3BP1的RNA結(jié)合結(jié)構(gòu)域?qū)奂陵P(guān)重要,而NTF2樣結(jié)構(gòu)域不能被招募到SGs中,并且抑制原有SGs的形成。最后證實(shí)G3BP1過(guò)表達(dá)能夠增強(qiáng)病毒復(fù)制,說(shuō)明SG在NDV復(fù)制過(guò)程中發(fā)揮促進(jìn)作用。綜合以上結(jié)果表明:雞G3BP1在雞SG形成過(guò)程中至關(guān)重要,雞SG能夠促進(jìn)NDV復(fù)制,這為進(jìn)一步研究NDV和禽源細(xì)胞互作奠定了基礎(chǔ)。
[Abstract]:In order to understand the mechanism of stress granules (stress granules,SGs) formation in chicken cells and the role of SH3 binding protein 1 (G3BP1) in SG formation induced by Newcastle disease virus (NDV), NDV was used to infect HeLa cells. The localization of endogenous G3BP1 was detected by immunofluorescence assay. After exogenous transfection of chicken G3BP1 and its segmental domains, co-localization with endogenous SG markers was observed after different stress treatments. Finally, NDV, was infected after transfection of G3BP1. Western blot and TCID50 were used to detect viral replication. The results showed that NDV infection could induce endogenous G3BP1 aggregation to form SG, transfection of chicken G3BP1 into HeLa,DF-1 and CEF, and SG. could be observed in cells after different stress treatments. Different domains of chicken G3BP1 were transfected into HeLa cells and treated with oxidative stress and NDV respectively. The results showed that the RNA binding domain of G3BP1 was very important for aggregation, but NTF2 like domain could not be recruited into SGs and inhibited the formation of SGs. Finally, it was confirmed that G3BP1 overexpression could enhance viral replication, indicating that SG played a role in NDV replication. The above results show that chicken G3BP1 is very important in the formation of chicken SG, and chicken SG can promote NDV replication, which lays a foundation for further study on the interaction between NDV and avian origin cells.
【作者單位】： 山東農(nóng)業(yè)大學(xué)動(dòng)物科技學(xué)院;中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院上海獸醫(yī)研究所;吉林農(nóng)業(yè)大學(xué)動(dòng)物科學(xué)技術(shù)學(xué)院;
【基金】：國(guó)家自然科學(xué)基金重點(diǎn)項(xiàng)目(31530074);國(guó)家自然科學(xué)基金面上項(xiàng)目(31372421);國(guó)家自然科學(xué)基金青年基金(31400144)
【分類(lèi)號(hào)】：S852.65

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