【摘要】：目前已報道的喹諾酮類耐藥機制有多種,其中由質粒介導的耐藥機制合理地解釋了細菌耐藥性的高突變率及多種抗生素的耐藥相關性。質粒上攜帶的耐藥基因只介導細菌對喹諾酮類藥物的低水平耐藥,但是能夠誘導靶位基因突變,引起高水平耐藥。因此,國內外研究者一直在積極尋找能夠消除細菌耐藥性的方法。中藥因其天然環(huán)保、副作用小、應用安全等優(yōu)點,受到了研究者的青睞。本研究采用PCR擴增技術對83株禽源大腸桿菌進行質粒介導的喹諾酮類耐藥(PMQR)基因的檢測,同時微量肉湯稀釋法測定恩諾沙星(ENR)的最小抑菌濃度。對其中6株大腸桿菌進行10味中藥的抑菌試驗,選取五味子、黃連、黃芩3味中藥對6株耐藥菌進行消除培養(yǎng),篩選消除菌并通過抑菌試驗及PCR方法確定耐藥性及耐藥基因的消除情況,同時RT-qPCR分析消除前后耐藥基因表達量的變化。研究結果如下：83株禽源大腸桿菌PMQR基因檢出率為86.7%(qnr、aac (6')-Ib-cr、oqxAB分別為49.4%、83.1%、9.6%,未檢出qnrC和qepA基因)。PMQR基因在禽源大腸桿菌中具有很高的流行率。抑菌試驗顯示有50株大腸桿菌對ENR耐藥,占全部菌株的比例為60%。說明本研究中禽源大腸桿菌對喹諾酮類藥物的耐藥情況嚴重。10種中藥中山楂、五倍子、金銀花、黃柏、魚腥草的抑菌效果不明顯,艾葉和連翹抑菌效果相對較好,五味子、黃連、黃芩的抑菌效果最好。高、中、低劑量的五味子、黃連、黃芩提取液對6株大腸桿菌的耐藥性消除率在0-100%之間,高劑量組的消除效果最好。說明中藥具有消除耐藥性的作用而且存在完全消除的可能。進一步研究發(fā)現,中藥也具有消除耐藥基因的作用,黃連對耐藥基因的消除率最高可達100%。不過不同中藥和不同菌株間的消除效果有差異,而且并不都是高劑量組消除效果最好。陽性對照SDS對某一基因的消除率因菌株的不同有差異。RT-qPCR結果顯示3味中藥消除培養(yǎng)后,耐藥基因mRNA表達量均下降,表明耐藥基因mRNA表達水平與細菌耐藥的強度有關。
[Abstract]:There are many mechanisms of quinolone resistance reported at present, among which the plasmide-mediated drug resistance mechanism reasonably explains the high mutation rate of bacterial resistance and the correlation of resistance to various antibiotics. The drug resistance gene carried on the plasmid only mediates the low level resistance of bacteria to quinolones, but it can induce the mutation of target gene and induce high level of drug resistance. Therefore, domestic and foreign researchers have been actively looking for ways to eliminate bacterial resistance. Traditional Chinese medicine is favored by researchers because of its advantages of natural environmental protection, small side effects and safe application. In this study, 83 strains of avian Escherichia coli were detected for quinolone-resistant (PMQR) gene mediated by plasmid, and minimal inhibitory concentration of enrofloxacin (ENR) was determined by broth dilution method. Six strains of Escherichia coli were tested by 10 kinds of traditional Chinese medicine, and 6 strains of drug-resistant bacteria were eliminated and cultured with Schisandra chinensis, Rhizoma Coptidis and Radix Scutellariae. The elimination of drug resistance and resistance genes were determined by bacteriostasis test and PCR method, and the changes of expression of drug resistance genes before and after elimination were analyzed by RT-qPCR. The results were as follows: the detection rate of PMQR gene in 83 strains of avian Escherichia coli was 86.7% (qnr,aac (6') -Ib-cr,oqxAB was 49.4% and 83.1%, respectively. No qnrC and qepA). PMQR genes were found to be highly prevalent in avian Escherichia coli. Bacteriostasis test showed that 50 strains of Escherichia coli were resistant to ENR, accounting for 60% of the total strains. The results showed that the resistance of avian Escherichia coli to quinolones was serious. The bacteriostatic effects of Hawthorn, Galla chinensis, Flos Lonicerae, Cortex Phellodendri and Houttuynia cordata were not obvious in 10 kinds of traditional Chinese medicine. The antibacterial effect of Artemisia argyi and Forsythia suspensa was relatively good, and Schisandra chinensis. The bacteriostatic effect of Coptis chinensis and Scutellaria baicalensis is the best. High, medium and low doses of Schisandra chinensis, Coptis chinensis, and Scutellaria baicalensis extract had a drug resistance elimination rate of 0-100% to 6 strains of Escherichia coli. It shows that Chinese medicine has the function of eliminating drug resistance and it is possible to eliminate the drug resistance completely. Further study showed that Chinese herbal medicine also had the effect of eliminating drug resistance gene, and the highest elimination rate of resistance gene of Coptis chinensis could reach 100%. However, the elimination effect of different Chinese medicine and different strains is different, and not all of the high dose groups have the best elimination effect. The results of RT-qPCR showed that the mRNA expression level of drug resistance gene decreased after three Chinese herbs were eliminated, indicating that the mRNA expression level of drug resistance gene was related to the strength of bacterial drug resistance.
【學位授予單位】：揚州大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2015
【分類號】：S852.61

【相似文獻】

相關期刊論文 前10條

1 Avian Pathology;呂玲;;禽源金黃色葡萄球菌生物膜形成與致病力無關[J];中國家禽;2009年23期

2 潘玉善;苑麗;吳華;劉建華;劉珍珍;趙宜雙;胡功政;;禽源奇異變形桿菌超廣譜β-內酰胺酶基因的分子特征[J];中國農業(yè)科學;2013年07期

3 龔建森;王鑫;韓先干;朱春紅;俞燕;劉學賢;徐步;;不同培養(yǎng)條件對禽源沙門菌菌毛基因表達的影響[J];畜牧獸醫(yī)學報;2014年01期

4 郭翠平;馬明杰;劉建民;呂佳泓;焦玉祥;朱巖麗;謝之景;姜世金;;山東省禽源大腸桿菌中超廣譜β-內酰胺酶的基因型檢測[J];中國動物傳染病學報;2013年05期

5 潘渭涓;陳祥;王曉泉;叢秋霞;潘志明;高崧;焦新安;;1993-2008年禽源大腸桿菌和沙門菌對喹諾酮類藥物耐藥性分析[J];中國人獸共患病學報;2009年07期

6 王建舫;呂艷麗;吳清民;蘇敬良;王忠田;陳艷紅;楊漢春;;禽源沙門菌gyrA基因多態(tài)性的檢測與分析[J];中國獸醫(yī)雜志;2008年10期

7 楊筱薇;曠代;潘海建;蘇旭東;吳麗萍;張建民;;上海市禽源阿貢納沙門氏菌耐藥性及脈沖場凝膠電泳分型研究[J];中國畜牧獸醫(yī);2014年02期

8 金文杰,鄭志明,王倩倩,秦愛建,劉岳龍,邵紅霞;禽源性大腸桿菌HPI irp2基因序列的擴增及比較[J];揚州大學學報;2005年03期

9 陳祥;趙李祥;高崧;王曉泉;焦新安;劉賢進;劉秀梵;;禽源大腸桿菌的生物表型特性[J];中國預防獸醫(yī)學報;2008年10期

10 李昆明;姚惠霞;劉曉琳;王新衛(wèi);;河南部分地區(qū)17株禽源大腸桿菌的耐藥性分析[J];安徽農業(yè)科學;2010年31期

相關會議論文 前10條

1 林居純;馬馳;陳雅莉;覃春紅;張輝建;;禽源金黃色葡萄球菌耐藥性檢測[A];中國畜牧獸醫(yī)學會獸醫(yī)藥理毒理學分會第十次研討會論文摘要集[C];2009年

2 張維秋;潘渭涓;陳祥;耿士忠;黃金林;潘志明;焦新安;;禽源大腸埃希菌質粒介導的喹諾酮類藥物耐藥基因的檢測[A];中國畜牧獸醫(yī)學會食品衛(wèi)生學分會第十一次學術研討會論文集[C];2010年

3 李莎莎;孫亞妮;辛英豪;孫慧;姜世金;;禽源大腸桿菌喹諾酮類藥物耐藥機制的分析[A];山東畜牧獸醫(yī)學會禽病學專業(yè)委員會第一次學術研討會論文集[C];2009年

4 莊金秋;梅建國;劉曉倩;王艷;苗立中;沈志強;;禽源生物制品外源病毒檢測方法的建立及應用[A];中國畜牧獸醫(yī)學會獸醫(yī)公共衛(wèi)生學分會第三次學術研討會論文集[C];2012年

5 雷昌偉;黃茜;彭琳瑤;王紅寧;張安云;;禽源奇異變形桿菌β-內酰胺類耐藥機制研究[A];中國畜牧獸醫(yī)學會家畜傳染病學分會第八屆全國會員代表大會暨第十五次學術研討會論文集[C];2013年

6 李莎莎;孫亞妮;辛英豪;孫慧;姜世金;;山東省禽源大腸桿菌的分離鑒定[A];山東畜牧獸醫(yī)學會禽病學專業(yè)委員會第一次學術研討會論文集[C];2009年

7 陳祥;趙李祥;高崧;王曉泉;焦新安;劉秀梵;;禽源大腸桿菌的生物表型特性[A];中國畜牧獸醫(yī)學會禽病學分會第十四次學術研討會論文集[C];2008年

8 司興奎;陳土心;陳建紅;張濟培;顧萬鈞;;四株禽源Ⅰ型副粘病毒的多肽圖譜分析[A];中國畜牧獸醫(yī)學會禽病學會分會第十次學術研討會論文集[C];2000年

9 李莎莎;孫亞妮;辛英豪;孫慧;姜世金;;山東省禽源大腸桿菌抗喹諾酮類藥物的耐藥性檢測及耐藥機制的分析[A];中國畜牧獸醫(yī)學會家畜傳染病學分會第七屆全國會員代表大會暨第十三次學術研討會論文集（下冊）[C];2009年

10 孫慧;李莎莎;雷戰(zhàn);鄒金峰;聶兆晶;姜世金;;山東地區(qū)禽源大腸桿菌對氨基糖苷類藥物的耐藥性分析[A];山東畜牧獸醫(yī)學會禽病學專業(yè)委員會第一次學術研討會論文集[C];2009年

相關博士學位論文 前1條

1 潘玉善;禽源大腸桿菌、奇異變形桿菌多重耐藥的分子特征及CTX-M基因傳播擴散機制[D];河南農業(yè)大學;2012年

相關碩士學位論文 前9條

1 陳紅秀;抗豬干擾素-γ禽源單鏈抗體的制備及特性分析[D];西北農林科技大學;2012年

2 黃訓良;禽源大腸桿菌鏈霉素耐藥質粒的分離與鑒定及其耐藥基因的流行病學研究[D];揚州大學;2006年

3 王建舫;禽源沙門氏菌耐藥性監(jiān)測與分析[D];中國農業(yè)大學;2003年

4 劉紅玉;青島地區(qū)禽源E.coli毒力因子和耐藥性調查與分析[D];東北農業(yè)大學;2014年

5 李棟;禽源大腸桿菌質粒介導氟喹諾酮類耐藥基因的檢測及中藥消除耐藥性研究[D];揚州大學;2015年

6 潘渭涓;禽源大腸桿菌和沙門菌對喹諾酮類藥物耐藥性分析[D];揚州大學;2009年

7 肖建光;聯合用藥對禽源沙門氏菌的體外抑菌試驗[D];山東農業(yè)大學;2010年

8 謝榕;河北禽源大腸桿菌β-內酰胺酶基因監(jiān)測及質粒不相容群分析[D];河北農業(yè)大學;2014年

9 李莎莎;山東省禽源大腸桿菌血清型鑒定及喹諾酮類藥物耐藥性研究[D];山東農業(yè)大學;2010年

，

本文編號：2404139