【摘要】：本研究利用重組酶聚合酶擴增(RPA)技術(shù),根據(jù)水泡性口炎病毒印第安納型(VSV-IND)和新澤西型(VSVNJ)相對保守的L基因為靶序列設(shè)計并篩選出兩套特異性的引物和探針,建立了快速鑒別檢測水泡性口炎病毒兩種血清型的雙重?zé)晒釸T-RPA方法。試驗結(jié)果表明,該方法特異性強,與豬水泡病病毒(SVDV)、口蹄疫病毒(FMDV)、藍舌病病毒(BTV)、豬繁殖與呼吸綜合征病毒(PRRSV)、牛病毒性腹瀉病毒(BVDV)、豬瘟病毒(CSFV)等滅活抗原核酸無交叉反應(yīng);靈敏度高,最低可檢測核酸濃度為12.7fg/μL;簡便快速,反應(yīng)時間短(15min),且重復(fù)性好。利用所建立方法對124份臨床樣品進行檢測,結(jié)果與雙重?zé)晒釸T-PCR一致。本文為VSV-IND和VSV-NJ的快速鑒別檢測提供一種新方法,尤其適合現(xiàn)場檢疫或基層實驗室的快速檢測。
[Abstract]:In this study, (RPA) was amplified by recombinant enzyme polymerase. Two sets of specific primers and probes were designed and screened according to the relative conserved L-base of VSV-IND and (VSVNJ) of New Jersey type. A double fluorescence RT-RPA method for rapid identification and detection of two serotypes of vesicular stomatitis virus was established. The results showed that the method was specific to porcine blisters disease virus (SVDV), foot and mouth disease virus (SVDV), (FMDV), bluetongue virus (BTV), porcine reproductive and respiratory syndrome virus (PRRSV), bovine viral diarrhea virus (BVDV),). The inactivated antigen nucleic acid such as (CSFV) of CSFV had no cross reaction. The lowest detectable nucleic acid concentration is 12.7fg/ 渭 L, which is simple, rapid, short reaction time (15min) and reproducible. The established method was used to detect 124 clinical samples and the results were consistent with double fluorescence RT-PCR. This paper provides a new method for rapid identification and detection of VSV-IND and VSV-NJ, which is especially suitable for field quarantine or rapid detection in basic laboratory.
【作者單位】： 深圳出入境檢驗檢疫局動植物檢驗檢疫技術(shù)中心;中國檢驗檢疫科學(xué)研究院;
【基金】：“十三五”國家重點研發(fā)計劃課題(項目號:2016YFC1200905)題目:重要新發(fā)突發(fā)病原體應(yīng)急處置方案與規(guī)范研究 “十三五”國家重點研發(fā)計劃課題(項目號:2016YFD0500708),題目:豬重要疫病分子檢測技術(shù)研究~~
【分類號】：S852.65

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本文編號：2400477