【摘要】：本研究旨在探究短鏈脂肪酸(Short-chain fatty acids,SCFAs)調(diào)節(jié)豬卵巢顆粒細(xì)胞(Porcine granulosa cells,PGCs)性激素分泌的cAMP-PKA信號通路。試驗(yàn)分別采用不同濃度梯度(0、0.005、0.05、0.5、5、10mM)的乙酸、丙酸、丁酸,以及PKA激動劑Forskolin和cAMP的抑制劑Bupivacaine處理PGCs,分析 SCFAs 對 PGCs 的 G 蛋白偶聯(lián)受體 41(G protein coupled receptors 41,GPR41)和 GPR43、cAMP、孕酮(Progesterone,P4)、雌二醇(Estradiol,E2)及類固醇激素合成相關(guān)功能基因表達(dá)的影響。1 SCFAs對PGCs性激素合成的影響0.005～20 mM乙酸、0.005～0.05 mM丙酸對PGCs的P4分泌無顯著影響。但0.05 mM 丁酸顯著促進(jìn)PGCs的P4分泌(P0.05),0.5～10 mM丙酸、5～10 mM丁酸均顯著抑制P4分泌(P0.05)。0.05～20 mM乙酸、5～10 mM丙酸和丁酸顯著促進(jìn)PGCs的E2分泌(P0.05)。10 μM Forskolin 顯著促進(jìn) PGCs 的 P4 和 E2 分泌(P0.05)。5 mM 乙酸、丙酸、丁酸分別與10 μM Forskolin共處理組P4含量均顯著低于10μM Forskolin處理組(P0.05),E2水平均顯著低于5 mM乙酸(P0.05)和10μM Forskolin處理組(P0.05)。2.3 μM Bupivacaine顯著抑制P4的分泌(P0.05),但不影響E2分泌。5 mM乙酸與2.3 μM Bupivacaine共處理組E2水平顯著高于2.3μM Bupivacaine處理組(P0.05),低于 5 mM 乙酸處理組(P0.05)。5 mM 丙酸與 2.3μM Bupivacaine共處理組E2水平顯著低于5 mM丙酸處理組(P0.05);5 mM 丁酸與2.3μM Bupivacaine共處理組P4含量顯著低于2.3 μM Bupivacaine處理組(P0.05)。2 SCFAs對PGCs內(nèi)cAMP-PKA信號通路的影響2.1 GPR41 和 GPR43 的表達(dá)10 μMForskolin、2.3 μMBupivacaine、0.005～10mM 乙酸、0.005-0.5 mM 丙酸和0.005～5 mM 丁酸對PGCs的GPR41和GPR43 mRNA的表達(dá)無顯著影響。5～10 mM丙酸、10 mM 丁酸均顯著上調(diào)PGCs的GPR41和GPR43 mRNA表達(dá)(P0.05)。5 mM乙酸與10 μM Forskolin共處理顯著上調(diào)PGCs的GPR41和GPR43 mRNA表達(dá)(P0.05);5 mM丙酸與10 μM Forskolin共處理顯著上調(diào)PGCs的GPR41 mRNA 表達(dá)(P0.05),顯著下調(diào) PGCs 的 GPR43 mRNA 表達(dá)(P0.05);5 mM 丁酸與 10 μM Forskolin 共處理對 PGCs 的 GPR41 和 GPR43 mRNA 的表達(dá)無顯著影響。5mM 乙酸、丁酸分別與2.3 μMBupivacaine共處理對PGCs的GPR41、GPR43 mRNA表達(dá)均無顯著影響。5 mM丙酸與2.3 μM Bupivacaine共處理顯著上調(diào)PGCs 的 GPR43 mRNA 水平(P0.05)。2.2 cAMP10 pM Forskolin顯著上調(diào)細(xì)胞內(nèi)cAMP的含量(P0.05),5 mM乙酸、丙酸、丁酸分別顯著下調(diào)PGCs的cAMP含量(P0.05),5mM乙酸、丙酸、丁酸分別與10μM Forskolin共處理不影響Forskolin對cAMP含量的上調(diào)作用。2.3 μM Bupivacaine 顯著下調(diào) PGCs 內(nèi) cAMP 含量(P0.05),2.3 μM Bupivacaine分別與5 mM乙酸、丙酸、丁酸的共處理組PGCs內(nèi)cAMP含量均顯著低于2.3pM Bupivacaine處理組和5 mM乙酸、丙酸、丁酸處理組(P0.05)。3 SCFAs對PGCs類固醇激素合成功能基因表達(dá)的影響10 μM Forskolin顯著下調(diào)PGCs的ER-β mRNA表達(dá)(P0.05),顯著上調(diào)SF-1、StAR、3β-HSD、P450scc mRNA 表達(dá)量(P0.05)。2.3μM Bupivacaine顯著上調(diào)ER-β mRNA的表達(dá)(P0.05)、下調(diào)StAR、P450scc mRNA表達(dá)(P0.05)。5 mM乙酸顯著上調(diào)StAR mRNA的表達(dá)(P0.05),顯著下調(diào)ER-β mRNA的表達(dá)(P0.05)。5 mM 乙酸+10 μM Forskolin 共處理組 SF-1、StAR、3β-HSD、P450scc mRNA 水平顯著高于 5 mM 乙酸處理組(P0.05)。2.3μM Bupivacaine+5 mM乙酸處理組ER-β mRNA表達(dá)量顯著高于5 mM乙酸處理組,低于2.3 μM Bupivacaine 處理組(P0.05)。5 mM 丙酸顯著下調(diào) ER-β、SF-1、StAR、P450scc mRNA 的表達(dá)(P0.05)。10μMForskolin+5mM 丙酸處理組 SF-1、StAR、3β-HSD、P450sccmRNA 水平低于 10 μM Forskolin組(P0.05),高于 5 mM 丙酸組(P0.05)。2.3 μM Bupivacaine+5 mM丙酸處理組ER-β、SF-1、StARmRNA顯著高于5 mM丙酸組(P0.05),3β-HSD 低于 5 mM 丙酸組(P0.05),ER-β 和 StAR mRNA 低于2.3μM Bupivacaine 處理組(P0.05)。5 mM 丁酸顯著上調(diào) 3β-HSD mRNA 表達(dá)(P0.05),下調(diào) ER-β、SF-1、StAR、P450scc mRNA 表達(dá)(P0.05)。10 μM Forskolin+5 mM 丁酸處理組 StAR、3β-HSD、P450scc mRNA 表達(dá)量顯著低于 10 μM Forskolin 處理組(P0.05)。2.3 μM Bupivacaine+5 mM 丁酸共處理組ER-β、SF-1 mRNA表達(dá)量顯著高于5 mM 丁酸處理組(P0.05),3β-HSD mRNA 表達(dá)量顯著高于 2.3 μM Bupivacaine處理組(P0.05),ER-β、StAR mRNA 表達(dá)量顯著低于 2.3 μM Bupivacaine 處理組(P0.05)�？偨Y(jié):SCFAs通過PGCs上GPR41和GPR43介導(dǎo)cAMP-PKA通路影響PGCs孕酮和雌二醇的合成與分泌。
[Abstract]:......
【學(xué)位授予單位】：南京農(nóng)業(yè)大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號】：S828

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本文編號：2400503