發(fā)布時間：2018-12-15 17:11

【摘要】：為建立一種不提取病毒DNA,直接采用樣本上清液檢測犬細小病毒(CPV)的TaqMan熒光定量PCR方法,通過擴增CPV NS基因部分片段構建重組質粒,建立TaqMan熒光定量PCR方法;對建立的方法進行反應條件、特異性、敏感性的檢測;通過建立的方法對核酸熒光定量PCR和原液熒光定量PCR進行對比;最后對臨床中疑似的CPV病例進行檢測。結果顯示,建立的方法特異性好,對犬常見病毒無擴增。該方法檢測的靈敏度達101copies/L,該方法的批內變異系數(shù)為0.09%~1.30%,批間變異系數(shù)為0.57%~0.94%,重復性良好。核酸熒光定量PCR和原液熒光定量PCR的最低檢測濃度均可以達到101 copies/L,且原液熒光定量PCR的產(chǎn)物濃度約為核酸熒光定量PCR的7倍,提示核酸在提取過程中有大量的損耗。對187份臨床病料進行檢測,建立的方法共檢出128份陽性,與普通PCR和膠體金快速檢測板的陽性符合率均為100%,核酸法與原液法的符合率為100%。因此,本試驗建立的CPV病料原液TaqMan熒光定量PCR方法與普通PCR和膠體金快速檢測板相比,具有陽性檢出率更高、準確率更好的特點。
[Abstract]:In order to establish a TaqMan fluorescence quantitative PCR method for detecting canine parvovirus (CPV) by sample supernatant, the recombinant plasmid was constructed by amplifying part of CPV NS gene, and the TaqMan fluorescence quantitative PCR method was established. The reaction conditions, specificity and sensitivity of the established method were detected. The fluorescence quantitative PCR of nucleic acid was compared with the fluorescence quantitative PCR of the original solution by the established method. Finally, the suspected cases of CPV in clinic were detected. The results showed that the method was specific and could not amplify common viruses in dogs. The sensitivity of this method is 101copias / L, the coefficient of variation within the assay is 0.09 and the coefficient of variation between batches is 0.570.94 and the repeatability is good. The detection concentration of nucleic acid fluorescence quantitative PCR and original fluorescence quantitative PCR can reach 101 copies/L, and the product concentration of fluorescence quantitative PCR in the original solution is about 7 times of that of nucleic acid fluorescence quantitative PCR, which indicates that nucleic acid has a large loss in the extraction process. A total of 128 positive samples were detected from 187 clinical samples. The positive coincidence rate with PCR and colloidal gold rapid detection plate was 100, and the coincidence rate between nucleic acid method and original solution method was 100. Therefore, compared with ordinary PCR and colloidal gold rapid detection plate, the TaqMan quantitative PCR method of CPV raw material has higher positive detection rate and better accuracy than that of ordinary PCR and colloidal gold rapid detection plate.
【作者單位】： 成都軍區(qū)疾病預防控制中心;四川農業(yè)大學動物醫(yī)學院動物疫病與人類健康四川省重點實驗室;
【基金】：國家公益性行業(yè)(農業(yè))科研重大專項(201303042) 全軍醫(yī)學科技青年培育項目(14QNP057) 成都大熊貓繁育研究基金會項目(CPF2015-4)
【分類號】：S852.655

【參考文獻】

相關期刊論文 前9條

1 郭博;方和俊;劉小琬;楊凡;劉鵬娟;黃劍波;李萍;徐志文;朱玲;;豬薩佩羅病毒實時熒光定量RT-PCR檢測方法的建立與應用[J];中國獸醫(yī)科學;2015年09期

2 杜傳海;張文東;胡挺松;趙煥云;張應國;范泉水;張富強;劉勇;;云南省狂犬病病原監(jiān)測及病毒遺傳多樣性分析[J];西南國防醫(yī)藥;2013年05期

3 祝文琪;徐衛(wèi)康;陸彥;吳國娟;;犬細小病毒熒光定量PCR檢測方法的建立[J];動物醫(yī)學進展;2013年05期

4 宋桂強;劉玉潔;韓佃剛;信吉閣;邱薇;李作生;范泉水;;1株新發(fā)現(xiàn)的軍犬細小病毒的病原分離及VP2基因序列分析[J];云南大學學報(自然科學版);2007年S3期

5 張賀;李波;周虛;譚建華;;實時熒光定量PCR技術研究進展及應用[J];動物醫(yī)學進展;2006年S1期

6 歐陽松應,楊冬,歐陽紅生,馬鶴雯;實時熒光定量PCR技術及其應用[J];生命的化學;2004年01期

7 喬軍,孟慶齡,夏咸柱,何宏彬,范泉水;犬Ⅰ型腺病毒TN株的分離鑒定[J];動物醫(yī)學進展;2001年04期

8 夏咸柱,范泉水,扈榮良,黃耕,邱薇;Ⅱ型犬腺病毒自然弱毒YCA18株的實驗免疫研究[J];中國獸藥雜志;2001年02期

9 何洪彬,李金中,夏咸柱,黃耕,范泉水,余春,邱薇;犬瘟熱病毒野毒株H蛋白基因的序列分析[J];中國獸醫(yī)學報;1999年04期

【共引文獻】

相關期刊論文 前10條

1 張建桃;陳鴻;文晟;李晟華;鄧小玲;蘭玉彬;;柑橘黃龍病熱空氣快速處理溫度場分布特性試驗研究[J];農業(yè)工程學報;2017年08期

2 張娜娜;鄧永強;年慶功;康曉平;楊銀輝;秦成峰;;攜帶圣路易斯腦炎病毒特異基因片段的重組假病毒顆粒的構建與鑒定[J];軍事醫(yī)學;2017年03期

3 曹雪峰;弓超;王文博;陳錨錨;楊顯君;郭平;范泉水;鐘志軍;邱薇;;犬細小病毒的新型原液熒光定量PCR方法的建立[J];中國獸醫(yī)科學;2017年02期

4 孫濤;孔德英;滕少娜;鄧朝暉;;喀斯特炭疽菌TaqMan探針實時熒光PCR檢測方法的建立[J];貴州農業(yè)科學;2017年02期

5 曹雪峰;田一男;黃祥明;邱薇;楊顏銥;弓超;楊奎興;袁博;彭廣能;鐘志軍;;犬瘟熱病毒體外感染人源細胞的分子研究進展[J];病毒學報;2017年01期

6 李雨o，

本文編號：2381009