【摘要】：為研制更加安全有效且遺傳背景清晰的鼠傷寒沙門菌(S.typhimurium)疫苗弱毒株,本研究首先構(gòu)建了含缺失1 011 bp sseK1基因的重組自殺性質(zhì)粒PREΔsseK1,利用重組自殺性質(zhì)粒介導(dǎo)的等位基因交換技術(shù),兩步法篩選SL1344的sseK1缺失株。PCR、雙酶切及測(cè)序結(jié)果表明SL1344ΔsseK1構(gòu)建成功。生物學(xué)特性初步研究表明,與親本菌株SL1344相比,缺失株SL1344ΔsseK1保留了親本株SL1344的血清型1,4,5,12∶i∶1,2,且能夠穩(wěn)定遺傳缺失后的sseK1基因,生長(zhǎng)速度及生化特性沒(méi)有發(fā)生明顯改變。小鼠毒力試驗(yàn)表明,SL1344ΔsseK1缺失株口服感染6周齡BALB/c小鼠的LD_(50)為6.63×10~8CFU,毒力較親本株SL1344下降至0.048%。免疫保護(hù)效力試驗(yàn)顯示,小鼠免疫后第14天血清抗體Ig G含量達(dá)到最高,運(yùn)用鼠傷寒沙門菌野生毒株對(duì)免疫后第17天的小鼠攻毒有62.5%的保護(hù)率。以上研究結(jié)果表明,SL1344株sseK1基因缺失株構(gòu)建成功,且遺傳穩(wěn)定,毒力明顯降低,具有較好的免疫原性,為研究sseK1基因的致病機(jī)制及將其開(kāi)發(fā)為更加安全有效的沙門菌弱毒疫苗候選菌株奠定了基礎(chǔ)。
[Abstract]:In order to develop a more safe and effective attenuated strain of Salmonella typhimurium (S.typhimurium) vaccine with clear genetic background, a recombinant suicide plasmid PRE 螖 sseK1, containing the deletion of 1 011 bp sseK1 gene was constructed in this study. Two step method was used to screen the sseK1 deletion strain of SL1344 by using recombinant suicide plasmid mediated allele exchange technique. The results of PCR, double digestion and sequencing showed that SL1344 螖 sseK1 was successfully constructed. The preliminary study of biological characteristics showed that the missing strain SL1344 螖 sseK1 retained the serotype of the parent SL1344, and could stabilize the sseK1 gene after genetic deletion. The growth rate and biochemical characteristics of the missing sseK1 gene did not change obviously. The virulence test of mice showed that the LD_ (50) of 6-week-old BALB/c mice infected orally with SL1344 螖 sseK1 deletion strain was 6.63 脳 10 ~ (8) CFU, and the virulence of LD_ (50) was decreased to 0.048% than that of parent strain SL1344. The protective effect test showed that the content of serum Ig G reached the highest on the 14th day after immunization, and the protective rate of the wild strain of Salmonella typhimurium was 62.5% on the 17th day after immunization. The results showed that the sseK1 gene deletion strain of SL1344 strain was successfully constructed, and its genetic stability, virulence and immunogenicity were significantly decreased. The results provide a basis for studying the pathogenicity of sseK1 gene and developing it as a more safe and effective candidate for Salmonella attenuated vaccine.
【作者單位】： 河南科技大學(xué)動(dòng)物疫病與公共衛(wèi)生重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室;洛陽(yáng)市活載體生物材料與動(dòng)物疫病防控重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室;
【基金】：河南省科技攻關(guān)項(xiàng)目(112102110019)
【分類號(hào)】：S852.61

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本文編號(hào)：2376219