【摘要】：輪狀病毒(rotavirus,RV)是犢牛腹瀉的重要病因,筆者旨在建立基于恒溫隔絕PCR(insulated isothermal PCR,iiPCR)技術(shù)現(xiàn)場(chǎng)檢測(cè)牛輪狀病毒(bovine rotavirus,BRV)的方法。根據(jù)BRV和牦牛RVVP6基因序列,設(shè)計(jì)合成引物和探針,通過(guò)優(yōu)化反應(yīng)體系,配合商品化PetNAD核酸萃取試劑盒,建立了檢測(cè)BRV和牦牛RV的iiPCR方法。結(jié)果顯示該方法只能檢出BRV和牦牛RV,不能檢出牛冠狀病毒、牛星狀病毒、牛病毒性腹瀉-黏膜病病毒、牛大腸桿菌、牛沙門(mén)菌、牛艾美爾球蟲(chóng)、牛瑞氏隱孢子蟲(chóng)等無(wú)關(guān)病原;檢測(cè)下限為96.6copies·μL-1,重復(fù)性好;對(duì)30份牛腹瀉樣本和30份牦牛腹瀉樣本的檢測(cè)結(jié)果表明,本方法對(duì)BRV的檢出率是33.33%,對(duì)牦牛RV的檢出率為73.33%,與文獻(xiàn)報(bào)道的檢測(cè)BRV和牦牛RV的方法的符合率分別為100%;對(duì)2016年四川阿壩藏羌自治州14個(gè)牧場(chǎng)的88份犢牦牛腹瀉樣本RV的檢測(cè)結(jié)果顯示RV核酸陽(yáng)性檢出率為98.86%。本研究建立的BRV iiPCR方法特異性好、靈敏度高、重復(fù)性好,既可用于BRV檢測(cè),又可用于牦牛RV的檢測(cè);從核酸提取到報(bào)告檢測(cè)結(jié)果僅需1h,操作方便,可現(xiàn)場(chǎng)使用,為BRV的現(xiàn)場(chǎng)快速診斷提供有力的工具。
[Abstract]:Rotavirus (rotavirus,RV) is an important cause of calf diarrhea. The purpose of this paper is to establish a method for the field detection of bovine rotavirus (bovine rotavirus,BRV) based on isothermal isolation of PCR (insulated isothermal PCR,iiPCR. According to the sequence of BRV and yak RVVP6 gene, the primers and probes were designed and synthesized. By optimizing the reaction system and combining with the commercial PetNAD nucleic acid extraction kit, a iiPCR method for the detection of BRV and yak RV was established. The results showed that only BRV and yak RV, could not detect bovine coronavirus, bovine stellate virus, bovine viral diarrhea mucosal disease virus, bovine Escherichia coli, Salmonella bovis, Eimeria bovis, Cryptosporidium bovis and other unrelated pathogens. The detection limit was 96.6copies 渭 L -1 and the reproducibility was good. The detection results of 30 samples of bovine diarrhea and 30 samples of yak diarrhea showed that the detection rate of BRV and RV were 33.33 and 73.33, respectively. The coincident rate with the reported methods for the detection of BRV and yak RV was 100. RV analysis of 88 calf yak diarrhea samples from 14 farms in Aba Zang Qiang Autonomous Prefecture in Sichuan Province in 2016 showed that the positive rate of RV nucleic acid was 98.86%. The BRV iiPCR method established in this study has the advantages of good specificity, high sensitivity and good repeatability. It can be used for both BRV and yak RV detection. It takes only 1 hour to extract nucleic acid from nucleic acid to report the result of detection. It is easy to operate and can be used in the field. It provides a powerful tool for rapid diagnosis of BRV in the field.
【作者單位】： 西南民族大學(xué)生命科學(xué)與技術(shù)學(xué)院;國(guó)家民委青藏高原動(dòng)物疫病防控創(chuàng)新團(tuán)隊(duì);金瑞鴻捷(廈門(mén))生物科技有限公司;
【基金】：十三五國(guó)家重點(diǎn)研發(fā)計(jì)劃(2016YFD0500907) 國(guó)家民委科研項(xiàng)目(14XNZ025)
【分類(lèi)號(hào)】：S852.653

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