發(fā)布時間：2018-12-12 22:16

【摘要】：輪狀病毒(rotavirus,RV)是犢牛腹瀉的重要病因,筆者旨在建立基于恒溫隔絕PCR(insulated isothermal PCR,iiPCR)技術(shù)現(xiàn)場檢測牛輪狀病毒(bovine rotavirus,BRV)的方法。根據(jù)BRV和牦牛RVVP6基因序列,設(shè)計合成引物和探針,通過優(yōu)化反應(yīng)體系,配合商品化PetNAD核酸萃取試劑盒,建立了檢測BRV和牦牛RV的iiPCR方法。結(jié)果顯示該方法只能檢出BRV和牦牛RV,不能檢出牛冠狀病毒、牛星狀病毒、牛病毒性腹瀉-黏膜病病毒、牛大腸桿菌、牛沙門菌、牛艾美爾球蟲、牛瑞氏隱孢子蟲等無關(guān)病原;檢測下限為96.6copies·μL-1,重復(fù)性好;對30份牛腹瀉樣本和30份牦牛腹瀉樣本的檢測結(jié)果表明,本方法對BRV的檢出率是33.33%,對牦牛RV的檢出率為73.33%,與文獻報道的檢測BRV和牦牛RV的方法的符合率分別為100%;對2016年四川阿壩藏羌自治州14個牧場的88份犢牦牛腹瀉樣本RV的檢測結(jié)果顯示RV核酸陽性檢出率為98.86%。本研究建立的BRV iiPCR方法特異性好、靈敏度高、重復(fù)性好,既可用于BRV檢測,又可用于牦牛RV的檢測;從核酸提取到報告檢測結(jié)果僅需1h,操作方便,可現(xiàn)場使用,為BRV的現(xiàn)場快速診斷提供有力的工具。
[Abstract]:Rotavirus (rotavirus,RV) is an important cause of calf diarrhea. The purpose of this paper is to establish a method for the field detection of bovine rotavirus (bovine rotavirus,BRV) based on isothermal isolation of PCR (insulated isothermal PCR,iiPCR. According to the sequence of BRV and yak RVVP6 gene, the primers and probes were designed and synthesized. By optimizing the reaction system and combining with the commercial PetNAD nucleic acid extraction kit, a iiPCR method for the detection of BRV and yak RV was established. The results showed that only BRV and yak RV, could not detect bovine coronavirus, bovine stellate virus, bovine viral diarrhea mucosal disease virus, bovine Escherichia coli, Salmonella bovis, Eimeria bovis, Cryptosporidium bovis and other unrelated pathogens. The detection limit was 96.6copies 渭 L -1 and the reproducibility was good. The detection results of 30 samples of bovine diarrhea and 30 samples of yak diarrhea showed that the detection rate of BRV and RV were 33.33 and 73.33, respectively. The coincident rate with the reported methods for the detection of BRV and yak RV was 100. RV analysis of 88 calf yak diarrhea samples from 14 farms in Aba Zang Qiang Autonomous Prefecture in Sichuan Province in 2016 showed that the positive rate of RV nucleic acid was 98.86%. The BRV iiPCR method established in this study has the advantages of good specificity, high sensitivity and good repeatability. It can be used for both BRV and yak RV detection. It takes only 1 hour to extract nucleic acid from nucleic acid to report the result of detection. It is easy to operate and can be used in the field. It provides a powerful tool for rapid diagnosis of BRV in the field.
【作者單位】： 西南民族大學生命科學與技術(shù)學院;國家民委青藏高原動物疫病防控創(chuàng)新團隊;金瑞鴻捷(廈門)生物科技有限公司;
【基金】：十三五國家重點研發(fā)計劃(2016YFD0500907) 國家民委科研項目(14XNZ025)
【分類號】：S852.653

【相似文獻】

相關(guān)期刊論文 前10條

1 張惠芬;;人輪狀病毒Ⅱ型:體外培養(yǎng)[J];國外醫(yī)學(微生物學分冊);1981年03期

2 林偉池;污水中輪狀病毒的檢測[J];國外醫(yī)學(衛(wèi)生學分冊);1982年04期

3 吳慎,梁士哲,李印堂,魏喜仁,王振山,李遠志,范文光,吳士芳,宋志英,徐慶,張瑞山,鞠連才,虞愛華,雷小東,張翠英;輪狀病毒提取方法及其電鏡和血清學檢測[J];解放軍醫(yī)學雜志;1983年03期

4 趙筱祺;人輪狀病毒命名法[J];微生物學免疫學譯刊;1984年04期

5 閻沐京;任中原;;輪狀病毒樣因子是否為輪狀病毒屬中的新成員[J];國外醫(yī)學.流行病學傳染病學分冊;1984年06期

6 吳妙靈 ,白植生 ,吳妙靈;輪狀病毒酶聯(lián)免疫吸附試驗[J];微生物學免疫學譯刊;1985年03期

7 倪亞煒;豬和牛輪狀病毒的分離和鑒定[J];病毒學報;1985年01期

8 張傳安;;人輪狀病毒的血凝活性[J];預(yù)防醫(yī)學情報;1985年03期

9 古月;;牛奶中輪狀病毒抗體[J];國外醫(yī)學情報;1985年08期

10 Anna Maria Agllano ,李玉如;新的人輪狀病毒株的分離[J];微生物學免疫學譯刊;1986年04期

相關(guān)會議論文 前10條

1 胡秀華;;細胞培養(yǎng)與real-time RT-PCR相結(jié)合的方法檢測水體中感染性輪狀病毒[A];2006中國微生物學會第九次全國會員代表大會暨學術(shù)年會論文摘要集[C];2006年

2 夏樂樂;何彪;楊凡力;徐琳;涂長春;;蝙蝠輪狀病毒分離與鑒定[A];中國畜牧獸醫(yī)學會家畜傳染病學分會第八屆全國會員代表大會暨第十五次學術(shù)研討會論文集[C];2013年

3 王春鳳;王會巖;徐鳳宇;楊文杰;毛玉杰;單曉楓;劉尚高;;豬A組輪狀病毒Vp4全基因在大腸桿菌中的表達與檢測[A];第六屆全國會員代表大學暨第11次學術(shù)研討會論文集（上）[C];2005年

4 王春鳳;王會巖;徐鳳宇;楊文杰;毛玉杰;單曉楓;劉尚高;;豬A組輪狀病毒Vp4全基因在大腸桿菌中的表達與檢測[A];中國畜牧獸醫(yī)學會家畜傳染病學分會第六屆全國會員代表大會暨第11次學術(shù)研討會論文集[C];2005年

5 王春鳳;楊樹寶;胡靜濤;趙丹;張云龍;葉麗萍;吳慶海;劉尚高;;豬A組輪狀病毒VP4全基因的克隆與序列分析[A];中國畜牧獸醫(yī)學會家畜傳染病學分會第六屆全國會員代表大會暨第11次學術(shù)研討會論文集[C];2005年

6 王春鳳;于守平;高云航;姜秀云;劉尚高;;豬A組輪狀病毒VP4全基因片斷的克隆與序列分析[A];人畜共患傳染病防治研究新成果匯編[C];2004年

7 王春鳳;楊樹寶;胡靜濤;趙丹;張云龍;葉麗萍;吳慶海;劉尚高;;豬A組輪狀病毒VP4全基因的克隆與序列分析[A];第六屆全國會員代表大學暨第11次學術(shù)研討會論文集（上）[C];2005年

8 劉凱軍;;輪狀病毒非結(jié)構(gòu)蛋白NSP1與種屬限制性的相關(guān)性研究[A];第六屆全國免疫學學術(shù)大會論文集[C];2008年

9 王延東;楊少華;高運東;郭學軍;楊宏軍;劉曉;王長法;胡國良;仲躋峰;何洪彬;;輪狀病毒VP7基因與LTB基因的融合表達[A];中國畜牧獸醫(yī)學會家畜傳染病學分會第七屆全國會員代表大會暨第十三次學術(shù)研討會論文集（下冊）[C];2009年

10 陳衛(wèi)紅;曹玉華;張智軍;;輪狀病毒外殼蛋白VP4修飾Fe_3O_4納米粒子用于生物成像及藥物輸運的研究[A];中國化學會第28屆學術(shù)年會第4分會場摘要集[C];2012年

相關(guān)博士學位論文 前9條

1 李國華;桿狀病毒系統(tǒng)中地方株輪狀病毒蛋白的重組表達及病毒樣顆粒的構(gòu)建[D];中國協(xié)和醫(yī)科大學;2001年

2 魏靜;人源輪狀病毒T細胞識別及其小型豬腹瀉模型的建立[D];第三軍醫(yī)大學;2006年

3 王敏;基因優(yōu)化的表達人輪狀病毒重組腺病毒免疫效果研究[D];中國疾病預(yù)防控制中心;2008年

4 秦嵐;輪狀病毒NSP1抑制天然免疫機制及其對宿主蛋白調(diào)控的研究[D];北京協(xié)和醫(yī)學院;2010年

5 李晉濤;人源輪狀病毒的轉(zhuǎn)基因馬鈴薯口服疫苗研究[D];第三軍醫(yī)大學;2003年

6 劉勇;輪狀病毒VP7基因修飾、表達及免疫原性研究[D];中國協(xié)和醫(yī)科大學;2000年

7 劉馨;重組輪狀病毒VP4抗原的表達及免疫原性研究[D];中國協(xié)和醫(yī)科大學;2005年

8 李丹地;河北省盧龍地區(qū)輪狀病毒流行病學及G5P[6]毒株的分子特征研究[D];吉林大學;2008年

9 霍云雯;在昆蟲細胞中表達輪狀病毒我國地方株VP4并構(gòu)建病毒樣顆粒[D];中國協(xié)和醫(yī)科大學;2001年

相關(guān)碩士學位論文 前10條

1 曹思;細胞網(wǎng)格蛋白和內(nèi)體酸化對輪狀病毒侵入的影響[D];黑龍江八一農(nóng)墾大學;2016年

2 彭杰;樹，

本文編號：2375323