【摘要】：腹瀉是導(dǎo)致斷奶仔豬死亡的主要疾病,給養(yǎng)豬業(yè)帶來了巨大經(jīng)濟損失。E.coli F18菌株是引起斷奶仔豬腹瀉的主要病原菌。目前中國地方品種斷奶仔豬抗E.coli F18的遺傳基礎(chǔ)和調(diào)控機制尚不清楚,而且國內(nèi)地方品種對E.coli F18的抗性基因和遺傳機制可能有別于外來引進(jìn)品種。基因芯片及高通量測序等技術(shù)為E.Coli F18抗性候選基因的篩選提供了有力手段,但其前提需要獲得斷奶仔豬E.coli F18抗性型和敏感型全同胞個體,因此地方豬品種極端表型個體有效的篩選和鑒定已成為其抗性遺傳基礎(chǔ)研究的關(guān)鍵和瓶頸。此外,研究報道針對仔豬細(xì)菌性腹瀉,目前人為的細(xì)菌攻毒試驗是獲取素材的較好途徑。本研究以中國地方品種—梅山豬斷奶仔豬為研究對象,采用E.coli F18ac菌株攻毒試驗,并利用腸道細(xì)菌檢測、細(xì)菌計數(shù)以及小腸上皮細(xì)胞黏附試驗等方法進(jìn)行驗證,以期獲得E.coli F18抗性型和敏感型個體,為今后研究梅山豬抗E.coli F18遺傳機理提供寶貴素材,同時也為中國地方豬品種細(xì)菌性疾病模型的建立提供指導(dǎo)和參考。其次,結(jié)合課題組前期在蘇太豬上的研究進(jìn)展,對鞘糖脂生物合成—球系列通路及炎癥免疫通路相關(guān)基因在梅山豬攻毒群體中的表達(dá)水平進(jìn)行初步探究,旨在分析梅山豬E.coli F18腹瀉抗性的調(diào)控通路及關(guān)鍵基因,最終為國內(nèi)地方豬品種E.coli F18腹瀉的抗病育種提供一定的科學(xué)依據(jù)。主要試驗結(jié)果如下：1、梅山仔豬攻毒后出現(xiàn)腹瀉、輕度腹瀉和不腹瀉3種不同表型。腹瀉仔豬腸道內(nèi)容物中的E.coli F18數(shù)量遠(yuǎn)多于正常仔豬；黏附試驗發(fā)現(xiàn)腹瀉仔豬小腸上皮細(xì)胞大量黏附E.coli F18,而正常仔豬小腸上皮細(xì)胞與E.coli F18基本不黏附；病理組織切片結(jié)果表明,重度腹瀉仔豬病變腸道組織間隙充血,黏膜層絨毛脫落、長度縮短,由此可以推測E.coli F18與仔豬小腸上皮細(xì)胞受體結(jié)合后破壞了黏膜層絨毛的完整性,從而定居繁殖造成仔豬腹瀉。綜合上述結(jié)果,本試驗仔豬腹瀉確實由攻毒造成,獲得了E.coli F18抗性型和敏感型仔豬全同胞個體,即成功建立梅山豬斷奶仔豬腹瀉模型,為今后豬細(xì)菌性腹瀉遺傳基礎(chǔ)研究素材和抗病育種基礎(chǔ)群的獲得提供了切實有效的方法和途徑。2、試驗采用RT-PCR技術(shù)對鞘糖脂生物合成.—球系列及炎癥免疫通路相關(guān)基因在梅山豬E. coli F18抗性型和敏感型個體間的表達(dá)水平進(jìn)行探究。結(jié)果表明,鞘糖脂生物合成一球系列通路相關(guān)基因在抗性和敏感個體間的組織表達(dá)水平均沒有顯著差異(P0.05)；E.coli F18抗性組仔豬脾臟中的IL-1β、TNF-α基因表達(dá)量顯著高于敏感組(P0.05),抗性組淋巴結(jié)中的TNF-a基因表達(dá)量顯著高于敏感組(P0.05),抗性組胸腺中的SLA-3基因表達(dá)量也顯著高于敏感組(P0.05),此外BPI基因在抗性仔豬十二指腸中的表達(dá)量極顯著高于敏感個體(P0.01)。以上結(jié)果進(jìn)一步表明中國地方豬品種與外來品種抗E. coli F18的遺傳基礎(chǔ)和調(diào)控機制確實存在差異,在外來品種中發(fā)揮重要調(diào)控作用的鞘糖脂生物合成—球系列通路并未在梅山斷奶仔豬抗E. coli F18感染的過程中起到重要的調(diào)控作用,而炎癥免疫通路及相關(guān)基因?qū)τ诿飞綌嗄套胸i大腸桿菌抗性可能存在重要的調(diào)控作用。
[Abstract]:......
【學(xué)位授予單位】：揚州大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號】：S858.28

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本文編號：2369026