【摘要】：傳染性法氏囊病(Infectious bursal disease,IBD)是由傳染性法氏囊病病毒(Infectious bursal disease virus,IBDV)引起的雞的一種急性、高度接觸性傳染病。IBDV有兩個(gè)血清型,血清Ⅰ型和血清Ⅱ型,其中Ⅰ型對(duì)雞有致病性,Ⅱ型可以感染雞和火雞,但均沒(méi)有致病性。根據(jù)抗原和毒力的差異,血清Ⅰ型毒株可以分為經(jīng)典毒株(classical strains)、變異株(variant strains)和超強(qiáng)毒株(very virulent strains,vv IBDV).我國(guó)從上個(gè)世紀(jì)90年代開始出現(xiàn)vv IBDV,目前分離的野毒株也主要是vv IBDV。本研究通過(guò)對(duì)國(guó)內(nèi)近年來(lái)分離的5株vv IBDV的VP2基因進(jìn)行測(cè)序,發(fā)現(xiàn)其在七肽區(qū)326-332的氨基酸均為SWSASGS,在與毒力相關(guān)的特征性氨基酸位點(diǎn):222A、253Q、256I、279D、284A、294I和299S也都沒(méi)有發(fā)生變化。通過(guò)SPF雞致病性試驗(yàn),5個(gè)毒株引起的死亡率都在47%以上,說(shuō)明vv IBDV近20年來(lái)毒力比較穩(wěn)定,沒(méi)有發(fā)生明顯變化;5個(gè)毒株中,GX與QL,HB96與HBY核苷酸同源性較高,分別達(dá)到99.8%和99.5%,說(shuō)明不同年代的分離株變異不大,同源性很高。B87是當(dāng)前使用最為廣泛的疫苗株,為了比較vv IBDV與B87序列之間的差異,對(duì)B87株種毒的不同雞胚傳代毒的VP2片段進(jìn)行測(cè)序和分析,發(fā)現(xiàn)E2和E6代毒株VP2序列存在7個(gè)氨基酸的變化。將E2和E6接種CEF細(xì)胞,發(fā)現(xiàn)E2不能在CEF上增殖,而E6可以產(chǎn)生明顯的CPE,說(shuō)明兩個(gè)毒株對(duì)CEF的嗜性不同。分別將E2和E6接種3周齡SPF雞,進(jìn)行毒力比較,第7天開始,E2代出現(xiàn)囊體比下降,BB指數(shù)明顯低于E6代毒株;E2代法氏囊濾泡萎縮嚴(yán)重,結(jié)構(gòu)松散,E6代毒株只有部分濾泡出現(xiàn)萎縮,濾泡間隔基本正常,說(shuō)明E2,E6代毒株對(duì)SPF雞的法氏囊毒力存在明顯差異。根據(jù)IBDV相關(guān)研究結(jié)果以及兩個(gè)毒株的VP2序列差異,推測(cè)Q253H/D279N/A284T三個(gè)位點(diǎn)是影響IBDV毒力和細(xì)胞嗜性的分子基礎(chǔ)。為進(jìn)一步研究影響IBDV毒力和細(xì)胞嗜性分子機(jī)制,利用高保真的DNA聚合酶通過(guò)一步法擴(kuò)增獲得IBDV B87基因組A,B片段,并通過(guò)重疊PCR的方法成功在基因組兩端引入Ham Rz和Hdv Rz核酶序列,保證轉(zhuǎn)錄水平基因組的完整性,然后將帶有核酶序列的A,B片段克隆到真核表達(dá)載體p CAGGS的CMV增強(qiáng)子和雞β-actin啟動(dòng)子下游,成功構(gòu)建出含有B87完整基因組的p CAGGSA和p CAGGSB真核表達(dá)載體,經(jīng)脂質(zhì)體介導(dǎo)共轉(zhuǎn)染DF1細(xì)胞,12h后可以通過(guò)間接免疫熒光檢測(cè)到IBDV特異的蛋白。
[Abstract]:Infectious bursal disease (Infectious bursal disease,IBD) is an acute and highly contagious disease in chickens caused by infectious bursal disease virus (Infectious bursal disease virus,IBDV). IBDV has two serotypes, serotype I and serotype 鈪，

本文編號(hào)：2363128