【摘要】：[目的]克隆表達(dá)羊口瘡病毒ORFV119蛋白,以純化重組蛋白為免疫原制備鼠多克隆抗體,并鑒定抗體的特性。[方法]PCR擴(kuò)增ORFV119基因,克隆入原核表達(dá)載體p ET-28a(+)中構(gòu)建重組質(zhì)粒p ET28a-119。經(jīng)雙酶切和測(cè)序正確后,轉(zhuǎn)化感受態(tài)大腸桿菌BL21,IPTG誘導(dǎo)表達(dá),SDS-PAGE鑒定融合蛋白表達(dá)情況。表達(dá)產(chǎn)物進(jìn)行超聲破碎和Ni柱純化,之后目的蛋白免疫BALB/c小鼠,制備ORFV119多克隆抗體并對(duì)其通過中和實(shí)驗(yàn)進(jìn)行鑒定。[結(jié)果]成功構(gòu)建重組質(zhì)粒p ET28a-119,在大腸桿菌BL21中ORFV119融合蛋白以部分可溶形式表達(dá)。可溶性目的蛋白純化后作為免疫原制備鼠多克隆抗體,抗體效價(jià)達(dá)1∶12 800,中和實(shí)驗(yàn)顯示該多抗具有保護(hù)作用,可減輕宿主細(xì)胞在病毒感染時(shí)的病變效應(yīng)(中和效價(jià)66 ND50/m L)。[結(jié)論]成功誘導(dǎo)表達(dá)、純化ORFV119蛋白并制備其多克隆抗體,為深入研究ORFV感染、發(fā)病機(jī)理及羊口瘡疾病的臨床診斷奠定基礎(chǔ)。
[Abstract]:[objective] to clone and express the ORFV119 protein of sheep mouth sore virus and to prepare mouse polyclonal antibody using purified recombinant protein as immunogen, and to identify the characteristics of the antibody. [methods] ORFV119 gene was amplified by PCR and cloned into prokaryotic expression vector p ET-28a () to construct recombinant plasmid p ET28a-119.. After double enzyme digestion and sequencing correctly, the expression of the fusion protein was induced by BL21,IPTG and identified by SDS-PAGE. The expressed product was purified by ultrasonic fragmentation and Ni column. Then BALB/c mice were immunized with the target protein. The polyclonal antibody of ORFV119 was prepared and identified by neutralization experiment. [results] Recombinant plasmid p ET28a-119, was successfully constructed to express ORFV119 fusion protein in Escherichia coli BL21 in partially soluble form. The purified soluble target protein was used as immunogen to prepare mouse polyclonal antibody. The titer of antibody reached 1:12 800. The neutralization experiment showed that the polyclonal antibody had protective effect. It can alleviate the pathological effect of virus infection in host cells (neutralizing titer 66 ND50/m L). [conclusion] the expression, purification and polyclonal antibody of ORFV119 protein were successfully induced and purified, which laid a foundation for the further study of ORFV infection, pathogenesis and clinical diagnosis of sheep aphthous ulcer.
【作者單位】： 南方醫(yī)科大學(xué)檢驗(yàn)與生物技術(shù)學(xué)院抗體工程研究所;佛山科學(xué)技術(shù)學(xué)院口腔醫(yī)學(xué)院醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)學(xué)系;
【基金】：國家自然科學(xué)基金項(xiàng)目(“羊痘病毒ORFV119蛋白與宿主細(xì)胞相互作用的分子機(jī)制”,No.31170147;“羊口瘡病毒ORFV118蛋白調(diào)控宿主細(xì)胞凋亡的分子機(jī)制研究”,No.31672536)
【分類號(hào)】：S852.654

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本文編號(hào)：2350171