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【摘要】：H3N2亞型犬流感病毒(Canine influenza virus,CIV)可以在犬中迅速的傳播,甚至引起犬的死亡,也可感染其他哺乳動物。目前該病毒致病的分子機制尚不清楚。為此,本研究采用RT-PCR技術擴增犬流感病毒A/Canine/Zhejiang/01/2010(H3N2)(簡稱ZJ2010)的PB2、PB1、PA、HA、NP、NA、M和NS 8個基因片段,并分別克隆至雙向表達載體p BD上。采用8質粒系統(tǒng)共轉染293T細胞,轉染48 h后加入TPCK胰酶作用2 h,將上清和細胞一同接種9~11日齡SPF雞胚,并檢測血凝效價。結果顯示,本研究成功拯救獲得了病毒株r ZJ2010。r ZJ2010株的8個基因片段的序列均與親本ZJ2010株的序列相同。r ZJ2010株與ZJ2010株在鼠的肺和鼻中復制水平接近。這些結果證實,本研究已成功建立H3N2亞型犬流感病毒反向株遺傳操作系統(tǒng),為該病毒的致病機理、傳播機制以及跨宿主傳播機制研究等奠定了技術平臺。
[Abstract]:H3N2 subtype (Canine influenza virus,CIV can spread rapidly in dogs, even cause death in dogs and infect other mammals. The molecular mechanism of the disease is unclear. In this study, the PB2,PB1,PA,HA,NP,NA,M and NS fragments of canine influenza virus A/Canine/Zhejiang/01/2010 (H3N2) (ZJ2010) were amplified by RT-PCR and cloned into bidirectional expression vector p BD. 293T cells were co-transfected with 8 plasmids. After 48 h of transfection, the supernatants and cells were incubated with TPCK trypsin for 2 h. The supernatants and cells were inoculated with SPF chicken embryos at the age of 9 and 11 days, and the hemagglutination titers were detected. The results showed that the sequence of 8 gene fragments of r ZJ2010.r ZJ2010 strain was the same as that of parent ZJ2010 strain, and the replication level of r ZJ2010 strain and ZJ2010 strain was similar in lung and nose of mice. These results confirm that the genetic operating system of H3N2 subtype canine influenza virus reverse strain has been successfully established in this study, which provides a technical platform for the study of the pathogenic mechanism, transmission mechanism and cross-host transmission mechanism of the virus.
【作者單位】： 黑龍江大學;中國農業(yè)科學院上海獸醫(yī)研究所;
【基金】：國家自然科學基金項目(31302115,31472206) 國家重點研發(fā)計劃(2016YFD0500204) 上海市科技興農重點攻關項目(滬農科攻字(2015字)第1-11字號)
【分類號】：S852.655

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