【摘要】：為構建新孢子蟲和弓形蟲AMA1基因重組腺病毒,并分析其免疫原性,本試驗根據(jù)新孢子蟲和弓形蟲AMA1基因序列的開放閱讀框,設計新孢子蟲和弓形蟲交叉抗原AMA1基因通用引物,構建重組克隆質(zhì)粒pMD18T-NcAMA1、pMD18T-TgAMA1及重組腺病毒穿梭質(zhì)粒ADV4-Nc/TgAMA1,將ADV4-Nc/TgAMA1和骨架質(zhì)粒pacAd5線性化后共轉(zhuǎn)染293T細胞,包裝Ad5-Nc/TgAMA1重組腺病毒,測定病毒滴度后,收集病毒液接種BALB/c小鼠,間接ELISA檢測小鼠血清IgG抗體水平。結果顯示,Nc/TgAMA1在Ad5-Nc/TgAMA1重組腺病毒中獲得表達,測定Ad5-Nc/TgAMA1重組腺病毒滴度為109 PFU/mL,接種BALB/c小鼠后,Ad5-Nc/TgAMA1接種組IgG抗體水平明顯高于pVAX1-Nc/TgAMA1質(zhì)粒組和PBS對照組。結果表明,構建的Ad5-Nc/TgAMA1重組腺病毒能誘導小鼠產(chǎn)生特異性體液免疫應答。本試驗為新孢子蟲和弓形蟲交叉抗原AMA1基因重組腺病毒載體疫苗的研制奠定了基礎。
[Abstract]:In order to construct the recombinant adenovirus of AMA1 gene of Neosporidium and Toxoplasma gondii, and analyze its immunogenicity, a universal primer for AMA1 gene of new sporidium and Toxoplasma gondii cross-antigen was designed according to the open reading frame of AMA1 gene sequence of Neosporidium and Toxoplasma gondii. The recombinant clone plasmid pMD18T-NcAMA1,pMD18T-TgAMA1 and the recombinant adenovirus shuttle plasmid ADV4-Nc/TgAMA1, were constructed, the ADV4-Nc/TgAMA1 and the skeleton plasmid pacAd5 were linearized and co-transfected into 293T cells. The recombinant adenovirus was packaged with Ad5-Nc/TgAMA1 and the titer of the recombinant adenovirus was determined. The virus solution was collected and inoculated into BALB/c mice. The serum IgG antibody level was detected by indirect ELISA. The results showed that Nc/TgAMA1 was expressed in Ad5-Nc/TgAMA1 recombinant adenovirus. The titer of Ad5-Nc/TgAMA1 recombinant adenovirus was determined to be 109 PFU/mL, in BALB/c mice. The level of IgG antibody in Ad5-Nc/TgAMA1 inoculation group was significantly higher than that in pVAX1-Nc/TgAMA1 plasmid group and PBS control group. The results showed that Ad5-Nc/TgAMA1 recombinant adenovirus could induce specific humoral immune response in mice. This study laid a foundation for the preparation of recombinant adenovirus vector vaccine of AMA1 gene of new sporidium and Toxoplasma gondii.
【作者單位】： 延邊大學農(nóng)學院動物醫(yī)學系;
【基金】：國家自然科學基金(31160501、31360605) 吉林省重點科技攻關項目(20140204078NY) 吉林省教育廳重點項目(吉教科合字[2015]第1號) 吉林省自然科學基金(20160101201JC)
【分類號】：S852.7

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