【摘要】：利用原核表達(dá)系統(tǒng)表達(dá)水貂腸炎細(xì)小病毒(MEV)VP2衣殼蛋白,以制備抗VP2超免疫血清。根據(jù)VP2的基因序列,設(shè)計(jì)1對特異性引物,以MEV全基因組重組質(zhì)粒p B-MEV-L為模板,利用PCR技術(shù)擴(kuò)增出MEV VP2片段,并定向克隆到pET-32a載體中,經(jīng)酶切與序列測定,證明成功構(gòu)建了VP2基因原核表達(dá)質(zhì)粒pET-MEV-VP2。將其轉(zhuǎn)化大腸桿菌BL21(DE3),經(jīng)IPTG誘導(dǎo)后實(shí)現(xiàn)了高效表達(dá)。免疫印跡試驗(yàn)表明,獲得的重組蛋白具有較好的反應(yīng)原性。以該蛋白為免疫原免疫新西蘭兔,制備抗血清,四免后用ELISA方法檢測其效價(jià)達(dá)到1∶1 024。免疫熒光試驗(yàn)證明,獲得的抗體具有良好的結(jié)合活性。為MEV的病原生物學(xué)研究奠定基礎(chǔ)。
[Abstract]:(MEV) VP2 capsid protein of mink enteritis virus was expressed by prokaryotic expression system to prepare anti VP2 superimmune serum. According to the gene sequence of VP2, a pair of specific primers were designed. The MEV VP2 fragment was amplified by PCR using the recombinant plasmid p B-MEV-L of MEV genome as template, and cloned into pET-32a vector, and then was digested and sequenced. It was proved that the prokaryotic expression plasmid pET-MEV-VP2. of VP2 gene was successfully constructed. It was transformed into Escherichia coli BL21 (DE3) and highly expressed by IPTG induction. Western blotting test showed that the recombinant protein had good reactivity. The antiserum was prepared by immunizing New Zealand rabbits with this protein. The titer of the antiserum was detected by ELISA method at 1:1. Immunofluorescence assay showed that the obtained antibody had good binding activity. To lay a foundation for the study of pathogenic biology of MEV.
【作者單位】： 新疆農(nóng)業(yè)大學(xué)動物醫(yī)學(xué)學(xué)院;中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院北京畜牧獸醫(yī)研究所;中國農(nóng)業(yè)大學(xué)生物學(xué)院;
【基金】：國家高技術(shù)研究發(fā)展計(jì)劃(863)項(xiàng)目(2011AA10A213) 中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院創(chuàng)新工程項(xiàng)目(ASTIP-IAS15)
【分類號】：S852.65

【相似文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前10條

1 魯宏偉;閆強(qiáng);陳明勇;王賓;;傳染性法氏囊病病毒VP2基因真核表達(dá)載體的構(gòu)建及初步表達(dá)[J];動物醫(yī)學(xué)進(jìn)展;2006年06期

2 黃超華;楊漢春;鄭世軍;;雞傳染性貧血病毒VP2基因在真核細(xì)胞中的表達(dá)以及對宿主細(xì)胞增殖的影響[J];中國獸醫(yī)雜志;2007年06期

3 陳忠斌,徐宜為,于康震,王艷華,袁世山,王秀麗,盧景良;傳染性法氏囊病病毒VP2基因的克隆和鑒定[J];中國獸醫(yī)學(xué)報(bào);1997年01期

4 王曉艷;王笑梅;高玉龍;高宏雷;陸桂麗;;雞傳染性貧血病毒VP2基因的表達(dá)及其免疫活性分析[J];微生物學(xué)報(bào);2006年05期

5 陳勝男;馬素貞;翟少倫;簡子健;;犬細(xì)小病毒VP2基因原核表達(dá)條件優(yōu)化與蛋白純化[J];新疆農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào);2011年01期

6 祁小樂;高立;吳關(guān);鄧小蕓;余飛;張禮洲;秦立廷;高玉龍;王永強(qiáng);高宏雷;劉娣;華育平;王笑梅;;雞傳染性法氏囊病病毒VP2基因突變對病毒體外復(fù)制的影響[J];畜牧獸醫(yī)學(xué)報(bào);2011年11期

7 易立;程世鵬;閆喜軍;柴秀麗;羅國良;張海玲;王建科;趙建軍;;犬細(xì)小病毒的分離鑒定及VP2基因的克隆分析[J];畜牧與獸醫(yī);2008年04期

8 易立;程世鵬;閆喜軍;王建科;羅彬;;犬細(xì)小病毒VP2基因的遺傳變異分析[J];病毒學(xué)報(bào);2009年06期

9 田麗紅;華育平;;虎源貓泛白細(xì)胞減少癥病毒VP2基因的原核表達(dá)及其抗原特性[J];中國獸醫(yī)學(xué)報(bào);2010年05期

10 葉新慧;申魁魁;符欣蕙;王麗霞;李恭賀;張明;盧晟盛;盧克煥;鄭喜邦;;犬細(xì)小病毒VP2基因的克隆與生物信息學(xué)分析[J];基因組學(xué)與應(yīng)用生物學(xué);2012年06期

相關(guān)會議論文 前10條

1 楊松濤;夏咸柱;喬軍;王鐵成;常爽;黃耕;;虎源貓泛白細(xì)胞減少癥病毒VP2基因在畢赤酵母中的表達(dá)[A];第十一次全國養(yǎng)犬學(xué)術(shù)研討會論文集[C];2005年

2 曹冰玉;王永山;范紅結(jié);歐陽偉;王忠燦;唐雨德;;近期引起免疫失敗的傳染性法氏囊病病毒VP2基因在大腸桿菌中的表達(dá)[A];中國畜牧獸醫(yī)學(xué)會獸醫(yī)公共衛(wèi)生學(xué)分會第二次學(xué)術(shù)研討會論文集[C];2010年

3 曹冰玉;王永山;范紅結(jié);歐陽偉;王忠燦;唐雨德;;近期引起免疫失敗的傳染性法氏囊病病毒VP2基因在大腸桿菌中的表達(dá)[A];第四屆第十次全國學(xué)術(shù)研討會暨動物微生態(tài)企業(yè)發(fā)展戰(zhàn)略論壇論文集（下冊）[C];2010年

4 王帥濤;王新衛(wèi);王川慶;楊霞;姚惠霞;王澤霖;;5株雞傳染性法氏囊病病毒地方流行株的分離鑒定及VP2基因序列分析[A];中國畜牧獸醫(yī)學(xué)會禽病學(xué)分會第十六次學(xué)術(shù)研討會論文集[C];2012年

5 邱薇;范泉水;李作生;楊美峰;鄭穎;尹惠瓊;王雙印;李江;夏咸柱;;犬細(xì)小病毒VP2基因的變異研究[A];中國畜牧獸醫(yī)學(xué)會養(yǎng)犬學(xué)分會第十二次全國養(yǎng)犬學(xué)術(shù)研討會論文集[C];2007年

6 王永山;歐陽偉;潘群興;周宇;范紅結(jié);張海彬;王忠燦;唐雨德;;近期引起免疫失敗的傳染性法氏囊病病毒VP2基因的分子特征[A];2008年中國微生物學(xué)會學(xué)術(shù)年會論文摘要集[C];2008年

7 李文虎;李姍姍;趙明秋;陳金頂;;犬細(xì)小病毒的分離與VP2基因序列的遺傳進(jìn)化分析[A];2012年鄂粵微生物學(xué)學(xué)術(shù)年會——湖北省暨武漢微生物學(xué)會成立六十年慶祝大會論文集[C];2012年

8 王永山;歐陽偉;潘群興;李銀;范紅結(jié);張海彬;王忠燦;唐雨德;;近期地方發(fā)生傳染性法氏囊病病毒VP2基因的分子特征[A];中國畜牧獸醫(yī)學(xué)會禽病學(xué)分會第十四次學(xué)術(shù)研討會論文集[C];2008年

9 宋桂強(qiáng);劉玉潔;邱薇;李作生;范泉水;;犬細(xì)小病毒的病原分離、鑒定及VP2基因序列分析[A];中國畜牧獸醫(yī)學(xué)會養(yǎng)犬學(xué)分會第十二次全國養(yǎng)犬學(xué)術(shù)研討會論文集[C];2007年

10 王永山;歐陽偉;潘群興;范紅結(jié);張海彬;王忠燦;唐雨德;譚維國;;近期引起免疫失敗的傳染性法氏囊病病毒VP2基因的分子特征[A];中國畜牧獸醫(yī)學(xué)會獸醫(yī)公共衛(wèi)生學(xué)分會第二次學(xué)術(shù)研討會論文集[C];2010年

相關(guān)博士學(xué)位論文 前2條

1 楊松濤;貓泛白細(xì)胞減少癥病毒VP2基因遺傳進(jìn)化及其重組蛋白免疫原性研究[D];吉林大學(xué);2006年

2 魏戰(zhàn)勇;豬細(xì)小病毒體外增殖的抑制因素、VP2基因變異及核酸疫苗的研究[D];南京農(nóng)業(yè)大學(xué);2004年

相關(guān)碩士學(xué)位論文 前10條

1 徐微;雞傳染性貧血病毒VP1和VP2基因的表達(dá)和免疫原性研究[D];中國獸醫(yī)藥品監(jiān)察所;2015年

2 曹冰玉;傳染性法氏囊病病毒VP2基因的表達(dá)與單克隆抗體的制備[D];南京農(nóng)業(yè)大學(xué);2011年

3 易立;犬細(xì)小病毒的分離鑒定、序列分析及VP2基因的融合表達(dá)[D];中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院;2008年

4 張坤;犬細(xì)小病毒環(huán)介導(dǎo)等溫?cái)U(kuò)增方法的建立和VP2基因的克隆表達(dá)[D];西南大學(xué);2009年

5 李迎曉;傳染性法氏囊病毒VP2基因的表達(dá)及其特異性單克隆抗體的研制[D];揚(yáng)州大學(xué);2005年

6 楊玲;犬細(xì)小病毒VP2基因的分子生物學(xué)特性的研究[D];揚(yáng)州大學(xué);2002年

7 許波;傳染性法氏囊病毒VP2基因原核表達(dá)及免疫原性研究[D];內(nèi)蒙古農(nóng)業(yè)大學(xué);2012年

8 邢國棟;北京市昌平區(qū)犬細(xì)小病毒分離株的鑒定與VP2基因序列分析[D];中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院;2012年

9 杜瑩;貓泛白細(xì)胞減少癥病毒VP2基因在重組桿狀病毒中的表達(dá)及其免疫原性研究[D];吉林大學(xué);2009年

10 黃成斌;抗傳染性法氏囊病毒單抗的制備和VP2基因的序列分析[D];安徽農(nóng)業(yè)大學(xué);2010年

，

本文編號：2308812