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水貂腸炎病毒VP2基因的原核表達及多克隆抗體的制備

發(fā)布時間:2018-11-03 19:44
【摘要】:利用原核表達系統(tǒng)表達水貂腸炎細小病毒(MEV)VP2衣殼蛋白,以制備抗VP2超免疫血清。根據(jù)VP2的基因序列,設計1對特異性引物,以MEV全基因組重組質(zhì)粒p B-MEV-L為模板,利用PCR技術擴增出MEV VP2片段,并定向克隆到pET-32a載體中,經(jīng)酶切與序列測定,證明成功構(gòu)建了VP2基因原核表達質(zhì)粒pET-MEV-VP2。將其轉(zhuǎn)化大腸桿菌BL21(DE3),經(jīng)IPTG誘導后實現(xiàn)了高效表達。免疫印跡試驗表明,獲得的重組蛋白具有較好的反應原性。以該蛋白為免疫原免疫新西蘭兔,制備抗血清,四免后用ELISA方法檢測其效價達到1∶1 024。免疫熒光試驗證明,獲得的抗體具有良好的結(jié)合活性。為MEV的病原生物學研究奠定基礎。
[Abstract]:(MEV) VP2 capsid protein of mink enteritis virus was expressed by prokaryotic expression system to prepare anti VP2 superimmune serum. According to the gene sequence of VP2, a pair of specific primers were designed. The MEV VP2 fragment was amplified by PCR using the recombinant plasmid p B-MEV-L of MEV genome as template, and cloned into pET-32a vector, and then was digested and sequenced. It was proved that the prokaryotic expression plasmid pET-MEV-VP2. of VP2 gene was successfully constructed. It was transformed into Escherichia coli BL21 (DE3) and highly expressed by IPTG induction. Western blotting test showed that the recombinant protein had good reactivity. The antiserum was prepared by immunizing New Zealand rabbits with this protein. The titer of the antiserum was detected by ELISA method at 1:1. Immunofluorescence assay showed that the obtained antibody had good binding activity. To lay a foundation for the study of pathogenic biology of MEV.
【作者單位】: 新疆農(nóng)業(yè)大學動物醫(yī)學學院;中國農(nóng)業(yè)科學院北京畜牧獸醫(yī)研究所;中國農(nóng)業(yè)大學生物學院;
【基金】:國家高技術研究發(fā)展計劃(863)項目(2011AA10A213) 中國農(nóng)業(yè)科學院創(chuàng)新工程項目(ASTIP-IAS15)
【分類號】:S852.65

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本文編號:2308812

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