【摘要】：褪黑素對(duì)生殖系統(tǒng)發(fā)揮著重要調(diào)節(jié)作用,本研究旨在探究褪黑素對(duì)牛卵母細(xì)胞體外成熟和孤雌胚胎發(fā)育的影響及作用機(jī)制。本試驗(yàn)用化學(xué)激活法對(duì)牛卵母細(xì)胞孤雌激活,且在卵母細(xì)胞體外成熟液和胚胎體外培養(yǎng)液中添加不同濃度(0 pmol/ml、10 pmol/ml、20 pmol/ml、30 pmol/ml)的褪黑素,以檢測(cè)牛卵母細(xì)胞成熟率和孤雌胚胎發(fā)育效果,同時(shí)利用DCHF-DA染色方法檢測(cè)卵母細(xì)胞中ROS水平,采用免疫熒光技術(shù)檢測(cè)褪黑素受體MT1在牛早期胚胎發(fā)育過(guò)程中的表達(dá)。結(jié)果表明,外源褪黑素可促進(jìn)卵母細(xì)胞體外成熟,卵母細(xì)胞成熟率隨褪黑素濃度的增加而升高。褪黑素顯著降低了卵母細(xì)胞中的ROS水平(P0.05),且卵母細(xì)胞中的ROS水平隨著褪黑素濃度增加而降低。褪黑素可顯著提高孤雌胚胎的卵裂率、桑葚胚率和囊胚率(P0.05),促進(jìn)胚胎發(fā)育。相比對(duì)照組,10pmol/ml褪黑素劑量更有利于胚胎發(fā)育,桑葚胚率和囊胚率都顯著高于其他試驗(yàn)組。另外,本研究首次探究了褪黑素受體MT1在早期胚胎發(fā)育過(guò)程中的表達(dá)分布。MT1在未卵裂的激活卵母細(xì)胞中主要分布于細(xì)胞膜上,隨著孤雌胚胎卵裂的進(jìn)行,受體表達(dá)量逐漸增加,主要表達(dá)定位于細(xì)胞膜上,隨著胚胎發(fā)育的進(jìn)行,MT1在卵裂球內(nèi)部開(kāi)始表達(dá)和分布,退化胚胎中MT1表達(dá)水平較低�？梢�(jiàn),褪黑素可促進(jìn)卵母細(xì)胞成熟和胚胎發(fā)育,且褪黑素受體MT1在胚胎發(fā)育早期已開(kāi)始表達(dá)。
[Abstract]:Melatonin plays an important role in regulating the reproductive system. The aim of this study was to investigate the effects of melatonin on bovine oocytes maturation in vitro and parthenogenetic embryo development. In this experiment, bovine oocyte parthenogenetic activation was carried out by chemical activation, and melatonin (0 pmol/ml,10 pmol/ml,20 pmol/ml,30 pmol/ml) was added to oocyte maturation fluid and embryo culture medium in order to detect the maturation rate of bovine oocyte and the effect of parthenogenetic embryo development. At the same time, the level of ROS in oocytes was detected by DCHF-DA staining, and the expression of melatonin receptor MT1 in bovine early embryo development was detected by immunofluorescence technique. The results showed that exogenous melatonin could promote the maturation of oocytes in vitro, and the maturation rate of oocytes increased with the increase of melatonin concentration. Melatonin significantly decreased the level of ROS in oocytes (P0.05), and the level of ROS in oocytes decreased with the increase of melatonin concentration. Melatonin could significantly increase the cleavage rate, morula rate and blastocyst rate of parthenogenetic embryos (P0.05). Compared with the control group, the dose of 10pmol/ml melatonin was more favorable for embryo development, and the morula rate and blastocyst rate were significantly higher than those in other experimental groups. In addition, the expression and distribution of melatonin receptor MT1 during early embryonic development were investigated for the first time. The expression of melatonin receptor MT1 increased gradually with the cleavage of parthenogenetic embryos, and MT1 was mainly distributed on the membrane of activated oocytes without cleavage. The expression of MT1 was mainly located on the cell membrane. With the development of the embryo, MT1 began to express and distribute in the blastomere, and the expression level of MT1 was lower in the degenerated embryos. Melatonin can promote oocyte maturation and embryo development, and the expression of melatonin receptor MT1 has already begun in the early stage of embryonic development.
【作者單位】： 安徽科技學(xué)院動(dòng)物科學(xué)學(xué)院;華中農(nóng)業(yè)大學(xué)動(dòng)物科學(xué)技術(shù)學(xué)院;
【基金】：國(guó)家自然科學(xué)基金項(xiàng)目(31301972) 安徽省自然科學(xué)基金項(xiàng)目(1308085QC66) 安徽省教育廳重點(diǎn)項(xiàng)目(KJ2009B090) 現(xiàn)代農(nóng)業(yè)產(chǎn)業(yè)技術(shù)體系建設(shè)專項(xiàng)(CARS-37-04B)
【分類號(hào)】：S823

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本文編號(hào)：2280427