【摘要】：為了建立針對(duì)鵝原始生殖細(xì)胞(primordial germ cells,PGCs)的分離純化與冷凍保存方法,對(duì)血液Ficoll密度梯度離心法、血液ACK裂解法、生殖腺胰酶-EDTA消化法與生殖腺消化結(jié)合體外短時(shí)間培養(yǎng)法4種PGCs分離方法以及STEM-CELLBANKER、CELLBANKER 2與10%DMSO加90%血清等3種凍存液進(jìn)行了比較研究。通過形態(tài)學(xué)觀察、糖原染色與PGCs特異免疫熒光染色鑒定PGCs,同時(shí)利用臺(tái)盼藍(lán)染色檢測(cè)PGCs活力等方法對(duì)其分離和保存效果進(jìn)行評(píng)價(jià)。結(jié)果表明,從鵝胚血液與生殖腺中均已經(jīng)成功分離到鵝PGCs;生殖腺消化結(jié)合體外短期培養(yǎng)法與傳統(tǒng)的血液分離法相比,獲得的鵝PGCs數(shù)量、純度與活力最高,每枚胚胎獲得的鵝PGCs數(shù)量達(dá)到115個(gè)、細(xì)胞純度達(dá)80.8%、細(xì)胞活率達(dá)88.3%;而商業(yè)化的干細(xì)胞冷凍保護(hù)液STEM-CELLBANKER同一般的體細(xì)胞凍存液相比更適合鵝PGCs的冷凍保存,冷凍解凍后的細(xì)胞存活率達(dá)90%左右。試驗(yàn)可以得出結(jié)論:生殖腺消化結(jié)合體外短期培養(yǎng)法成功分離到數(shù)量與純度都可觀的鵝PGCs,STEM-CELLBANKER凍存液能夠用于鵝PGCs的長(zhǎng)期冷凍保存。
[Abstract]:In order to establish a method for isolation, purification and cryopreservation of goose primordial germ cell (primordial germ cells,PGCs), blood Ficoll density gradient centrifugation and blood ACK lysis were studied. Four methods of isolation of PGCs from gonadal trypsin-EDTA digestion and gonadal digestion combined with short time culture in vitro were compared. Three kinds of cryopreservation solutions including STEM-CELLBANKER,CELLBANKER 2 and 10%DMSO plus 90% serum were compared. Morphological observation, glycogen staining and PGCs specific immunofluorescence staining were used to identify PGCs, and Trypan blue staining was used to detect the activity of PGCs. The results showed that goose PGCs; was successfully digested from goose embryo blood and gonads, and compared with the traditional blood separation method, goose PGCs was obtained with the highest quantity, purity and activity. The number of goose PGCs per embryo reached 115, the cell purity reached 80.8 and the cell viability rate reached 88.3.The commercial STEM-CELLBANKER was more suitable for the freezing preservation of goose PGCs than that of normal somatic cell cryopreservation. The survival rate of frozen and thawed cells was about 90%. The results showed that gonadal digestion combined with short-term culture in vitro successfully isolated goose PGCs,STEM-CELLBANKER cryopreservation solution with considerable quantity and purity, which could be used for long-term freezing preservation of goose PGCs.
【作者單位】： 江蘇省農(nóng)業(yè)科學(xué)院畜牧研究所/動(dòng)物品種改良和繁育重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室;
【基金】：江蘇省農(nóng)業(yè)科技自主創(chuàng)新資金項(xiàng)目[CX(14)2068] 江蘇省自然科學(xué)基金(BK20130718)
【分類號(hào)】：S835

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4 平述煌;樹

本文編號(hào)：2272679