大腸桿菌菌蛻制備的初步研究.pdf
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Heilongjiang Animal Science 148 and Veterinary Medicine № 7 20 10 大腸桿菌菌蛻制備的初步研究 1,2 2 1 1 3 , , , , 於 劍 密金玲 艾必燕 黃家政 聶 奎 1. , 400065 ;2 . , 400020 ;3. 重慶市中藥研究院 重慶 重慶出入境檢驗檢疫局 重慶 西南大學 , 4007 15 動物科技學院 重慶 中圖分類號:S852 . 5 文獻標識碼:B 文章編號:1004 7034 20 10 07 - 0 148 - 03 20 80 , Henrich B [1] 離心管冷卻后向其中加入800 L LB ; 世紀 年代 奧地利學者 等 利 μ 液體 培養(yǎng)基
用分子生物學技術(shù)將PhiX174 噬菌體的裂解基因E 28 ℃ 、200 r / min 振蕩培養(yǎng)60 min ,3 000 / rmin 離心 , 1 min ; 800 L , ,
克隆到含溫度敏感元件的表達載體中 在溫度敏感元 集菌 棄上清液 μ 將剩余菌液吹散混勻 ,E 。E 30 mg / L LB ;
件的調(diào)控下 裂解蛋白能夠進行限制性表達 基 涂布于含氯霉素 抗性的 固體平板上 91 , 28 ℃ 4 h , ;
因編碼一個含 個氨基酸的膜蛋白 該蛋白能夠融 正向培養(yǎng) 再倒置培養(yǎng)至單個菌落出現(xiàn) 挑 , LB ,
合革蘭陽性菌的內(nèi)外膜 并在菌膜上形成一個直徑為 取單個菌落于 液體培養(yǎng)基中培養(yǎng) 提取質(zhì)粒并進 行酶切電泳鑒定, 。
40 ~ 200 nm , 備用 的特異性跨膜孔道 跨膜孔道的形成使 1. 3 E , 裂解基因 的表達及其裂解動力學
得革蘭陽性菌內(nèi)外滲透壓發(fā)生改變 細胞內(nèi)容物由裂 30 L 3 mL , 取 μ 鑒定正確的菌液接種于 含氯霉素
解孔道排出 生成的這種革蘭陽性菌空殼被命名為菌 [2 - 3] 抗性的LB 液體培養(yǎng)基中,,28 ℃ 、200 r / min 搖床過夜 bacterial ghost 。 E
蛻 由于 基因滅活過程不會 ; , 30 mL LB
引起細菌表面結(jié)構(gòu)的任何理化變性, 培養(yǎng) 次日 轉(zhuǎn)接種于 含氯霉素抗性的 液 菌蛻仍保留活菌 , 體培養(yǎng)基中,
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