【摘要】：垂體腺苷酸環(huán)化酶激活肽(pituitary adenylate cyclase-activating polypeptide,PACAP)是由下丘腦合成并分泌,存在于人(Homo sapiens)和動(dòng)物體內(nèi)的生物活性物質(zhì),能夠刺激垂體生長(zhǎng)激素(growth hormone,GH)的合成與分泌,從而促進(jìn)動(dòng)物體的生長(zhǎng)發(fā)育。本研究首先克隆了豬(Sus scrofa)PACAP基因(p PACAP)的全長(zhǎng)c DNA,利用油紅O染色技術(shù)和q RT-PCR技術(shù)研究PACAP基因在3T3-L1前體脂肪細(xì)胞成脂分化過(guò)程中的表達(dá)規(guī)律;繼而構(gòu)建了真核表達(dá)載體p EGFP-p PACAP,將其轉(zhuǎn)染至小鼠(Mus musculus)3T3-L1前體脂肪細(xì)胞,48 h內(nèi)采用CCK-8法檢測(cè)細(xì)胞生長(zhǎng)情況并于48 h后檢測(cè)3T3-L1前體脂肪細(xì)胞中的p PACAP、脂肪酸合成酶(fatty acid synthase,FAS)和乙酰輔酶A羧化酶(acetyl-Co A carboxylase,ACC)m RNA的表達(dá)及pacap-EGFP融合蛋白的表達(dá)。成脂分化結(jié)果表明,PACAP m RNA隨著脂肪細(xì)胞的成熟,其表達(dá)量逐漸上升,在第4天時(shí),表達(dá)量最高;雙酶切及測(cè)序結(jié)果表明,成功構(gòu)建了p PACAP基因的真核表達(dá)載體p EGFP-p PACAP;真核表達(dá)載體轉(zhuǎn)入培養(yǎng)的3T3-L1前體脂肪細(xì)胞中后,在熒光顯微鏡下,重組質(zhì)粒組和空載體組均發(fā)出綠色熒光,48 h時(shí)轉(zhuǎn)染效率最高,且PACAP、FAS和ACC m RNA相對(duì)表達(dá)量均有極顯著的提高(P0.01),成功檢測(cè)到pacap融合蛋白。本研究結(jié)果表明,PACAP參與到脂肪形成的機(jī)制中。該結(jié)果為體外研究豬PACAP基因?qū)χ竞铣纱x及其機(jī)體代謝的調(diào)節(jié)機(jī)制提供了理論依據(jù)。
[Abstract]:Pituitary adenylate cyclase-activating polypeptide (PACAP) is synthesized and secreted by hypothalamus. It is a bioactive substance in human (Homo sapiens) and animals. It can stimulate the synthesis and secretion of pituitary growth hormone (GH) and promote the growth and development of animals. * we first cloned the full-length C DNA of the Sus scrofa PACAP gene (P PACAP), and studied the expression pattern of the PACAP gene in the adipocyte differentiation process of the pre adipocytes by using oil red O staining and Q RT-PCR technology. Then we constructed the eukaryotic expression vector, which was transfected into the mouse adipocytes, 48 CCK-8 method was used to detect the growth of cells within hours and the expression of p-PACAP, fatty acid synthase (FAS), acetyl-Co A carboxylase (ACC) m RNA and pacap-EGFP fusion protein in 3T3-L1 preadipocytes were detected 48 hours later. The expression level of P PACAP gene was the highest on the 4th day after maturation. The results of double enzyme digestion and sequencing showed that the eukaryotic expression vector p EGFP-p PACAP was successfully constructed. After the eukaryotic expression vector was transfected into the cultured 3T3-L1 preadipocyte, the recombinant plasmid and the empty vector both emitted green fluorescence under fluorescence microscope. At 8 h, the transfection efficiency was the highest, and the relative expression of PACAP, FAS and ACC m RNA increased significantly (P0.01). PACAP fusion protein was successfully detected. The results showed that PACAP was involved in the mechanism of adipose formation. * the results provide a theoretical basis for studying the regulation mechanism of Porcine PACAP gene on fat metabolism and metabolism in vitro. Basis.
【作者單位】： 浙江大學(xué)動(dòng)物科學(xué)學(xué)院;
【基金】：國(guó)家轉(zhuǎn)基因生物新品種培育科技重大專項(xiàng)(No.2014ZX08006-003)
【分類號(hào)】：S828

【參考文獻(xiàn)】

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【相似文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：2243468