【摘要】：本研究以廢棄豬卵巢為實(shí)驗(yàn)初始材料,用機(jī)械法抽取獲得未成熟卵母細(xì)胞,體外培養(yǎng)成熟后用于體外受精實(shí)驗(yàn)的研究。本文比較了影響豬卵母細(xì)胞體外受精的影響因素,以期能夠進(jìn)一步完善豬胚胎的體外生產(chǎn)體系,為胚胎技術(shù)的進(jìn)一步發(fā)展提供技術(shù)保障。本研究包括以下內(nèi)容:(1)比較在m TBM中添加不同濃度的咖啡因、不同受精時(shí)間及精子上浮時(shí)間對(duì)豬體外受精的影響。(2)比較豬卵母細(xì)胞體外不同成熟時(shí)間、受精過(guò)程中顆粒細(xì)胞的存在情況及低氧環(huán)境對(duì)豬體外受精的影響。(3)研究精子獲能液中添加不同濃度的Ionomycin及Ionomycin作用不同時(shí)間對(duì)豬體外成熟卵母細(xì)胞體外受精效果的影響。主要研究結(jié)果如下:1.以改良m TBM為基礎(chǔ)液,添加咖啡因?qū)κ芫咛サ穆蚜崖屎湍遗呗视忻黠@的促進(jìn)作用,添加3mmol/L咖啡因組的受精胚胎卵裂率顯著高于添加5mmol/L咖啡因組和未添加咖啡因組(P0.05),且該組的囊胚率最高;精子上浮處理1h組的卵裂率和囊胚率均顯著高于其它實(shí)驗(yàn)組(P0.05);精卵孵育時(shí)間對(duì)受精胚胎卵裂率無(wú)顯著影響(P0.05),隨受精時(shí)間延長(zhǎng)至9h,受精胚胎的囊胚率顯著降低。通過(guò)各實(shí)驗(yàn)組比較發(fā)現(xiàn),受精液中添加3mmol/L咖啡因,精子上浮1.0h,受精6h能得到較好的體外受精結(jié)果。2.體外成熟40~42h組的卵母細(xì)胞體外受精胚胎的卵裂率和囊胚率顯著高于體外成熟培養(yǎng)36~38h組和46~48h組(P0.05);保留2-3層顆粒細(xì)胞組與不脫顆粒細(xì)胞組的受精胚胎卵裂率和囊胚率差異均不顯著(P0.05),且這兩組的實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯著高于無(wú)顆粒細(xì)胞組(P0.05);就卵裂率和囊胚率而言,5%CO2組顯著高于10%CO2組和15%CO2組(P0.05)。通過(guò)對(duì)各實(shí)驗(yàn)組的比較,卵母細(xì)胞體外成熟培養(yǎng)40~42h,保留全部顆粒細(xì)胞和氣相環(huán)境為5%CO2能得到較好的體外受精結(jié)果。3.獲能液中添加10μmol/L的Ionomycin能顯著提高受精胚胎的卵裂率和囊胚率(P0.05);用Ionomycin處理精子30min能獲得較好的體外受精效果。
[Abstract]:In this study, the * oocytes from pigs were taken as experimental materials, and immature oocytes were obtained by mechanical extraction. In vitro fertilization and maturation experiments were carried out. The * * * factors affecting the in vitro fertilization of porcine oocytes were compared, in order to further improve the in vitro production system of pig embryo and further embryo technology. This research includes the following contents: (1) compare the effects of different concentrations of caffeine in M TBM, different fertilization time and sperm floating time on in vitro fertilization of pigs * * (2) compare the existence of granulosa cells in different maturation time of porcine oocytes, and the in vitro fertilization of pigs in hypoxia environment * (3) to study the effects of different concentrations of Ionomycin and Ionomycin on the in vitro fertilization of porcine in vitro maturation * oocytes. The main results are as follows: 1.. Using the modified m TBM as the base solution, adding caffeine can significantly promote the cleavage rate and blastocyst rate of fertilized embryos, and add 3mmol/L The cleavage rate of fertilized embryos in caffeine group was significantly higher than that in caffeine group (P The blastocyst rate of fertilized embryos decreased significantly after prolonging to 9 h. The results showed that the cleavage rate and blastocyst rate of oocytes in vitro fertilized embryos in 40-42 H group were significantly higher than those in 36-38 H group and in vitro matured embryos in 36-38 h group. The cleavage rate and blastocyst rate of fertilized embryos with 2-3 layers of granulosa cells and without degranulation cells were not significantly different (P 0.05), and the experimental results of these two groups were significantly higher than those of non-granulosa cells (P 0.05); the cleavage rate and blastocyst rate of 5% CO2 group were significantly higher than those of 10% CO2 group and 15% CO2 group (P 0.05). In vitro fertilization results were better when the oocytes were cultured in vitro for 40-42 hours and all granulosa cells and 5% CO2 were retained. 3. The cleavage rate and blastocyst rate of fertilized embryos were significantly increased by adding 10 micromol/L of Ionomycin to the capacitated medium (P 0.05), and the sperm treated with Ionomycin for 30 minutes had better in vitro fertilization effect.
【學(xué)位授予單位】：青海大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：S828

【相似文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前10條

1 范必勤,熊慧卿,劉鐵錚,徐曉波,邵春榮,B.G.勃拉吉特,W.R.杜克洛;家兔體外受精研究[J];江蘇農(nóng)業(yè)學(xué)報(bào);1987年01期

2 安聞;;黃牛體外受精發(fā)育成功[J];東北農(nóng)學(xué)院學(xué)報(bào);1987年01期

3 鍾生泉;唐維六;;多化性桑蠶品種的體外受精研究初報(bào)[J];廣東農(nóng)業(yè)科學(xué);1987年03期

4 張一峰;哺乳動(dòng)物體外受精研究進(jìn)展[J];國(guó)外畜牧學(xué)(草食家畜);1988年03期

5 晏文福;;日本牛體外受精卵冷凍后移植成功生產(chǎn)雙子[J];中國(guó)黃牛;1988年03期

6 張一峰;;家畜體外受精的研究進(jìn)展[J];國(guó)外畜牧科技;1988年02期

7 ;日獲得牛體外受精最高受胎率[J];內(nèi)蒙古畜牧科學(xué);1988年03期

8 ;牛羊體外受精研究的重大進(jìn)展[J];內(nèi)蒙古畜牧科學(xué);1989年01期

9 江金益,鐘聲,熊慧卿,范必勤;豬體外受精研究[J];江蘇農(nóng)業(yè)學(xué)報(bào);1990年03期

10 龐也非,旭日千;昆明小鼠卵子的體外受精及發(fā)育的研究[J];動(dòng)物學(xué)雜志;1990年02期

相關(guān)會(huì)議論文 前10條

1 許張曄;葉碧綠;;體外受精后出生的2歲幼兒生長(zhǎng)發(fā)育的研究[A];首屆滬浙婦產(chǎn)科學(xué)術(shù)論壇暨2006年浙江省婦產(chǎn)科學(xué)學(xué)術(shù)年會(huì)論文匯編[C];2006年

2 甘賢優(yōu);張波;周紅;馮貴雪;舒金輝;劉茵;高璇璇;;體外受精治療中取精困難患者的干預(yù)對(duì)策和效果評(píng)估[A];中華醫(yī)學(xué)會(huì)第六次全國(guó)生殖醫(yī)學(xué)學(xué)術(shù)會(huì)議�？痆C];2012年

3 王倩倩;朱依敏;吳明遠(yuǎn);;體外受精母親與子代健康隨訪分析[A];2009中國(guó)杭州生殖健康學(xué)術(shù)論壇暨浙江省計(jì)劃生育學(xué)與生殖醫(yī)學(xué)分會(huì)學(xué)術(shù)年會(huì)論文匯編[C];2009年

4 鄧冰冰;王文軍;李瑞岐;黃麗麗;張寧鋒;區(qū)頌邦;歐陽(yáng)能勇;;體外受精患者卵巢反應(yīng)不良的后續(xù)治療方案的比較[A];中華醫(yī)學(xué)會(huì)第十次全國(guó)婦產(chǎn)科學(xué)術(shù)會(huì)議婦科內(nèi)分泌會(huì)場(chǎng)（婦科內(nèi)分泌學(xué)組、絕經(jīng)學(xué)組、計(jì)劃生育學(xué)組）論文匯編[C];2012年

5 賈秀芬;周燕華;劉慧雯;金明順;;三種抗氧化劑對(duì)小鼠體外受精胚胎發(fā)育的影響[A];中國(guó)解剖學(xué)會(huì)第十一屆全國(guó)組織學(xué)與胚胎學(xué)青年學(xué)術(shù)研討會(huì)論文匯編[C];2009年

6 吳紅;李厚達(dá);;小鼠體外受精和精子冷凍的研究[A];中國(guó)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物學(xué)會(huì)第六屆學(xué)術(shù)年會(huì)論文集[C];2004年

7 馮秀清;陳雅雋;鐘淑琦;閆曉飛;董建將;雷蕾;;體外受精和孤雌活化過(guò)程中小鼠胚胎細(xì)胞骨架的動(dòng)態(tài)變化[A];2007年中國(guó)解剖學(xué)會(huì)第十屆全國(guó)組織學(xué)與胚胎學(xué)青年學(xué)術(shù)研討會(huì)論文摘要匯編[C];2007年

8 江楠;劉霞;蔡文偉;常永富;華科;王玉潔;徐營(yíng);;小鼠超短時(shí)體外受精研究[A];2012浙江省計(jì)劃生育與生殖醫(yī)學(xué)學(xué)術(shù)年會(huì)論文集[C];2012年

9 王麗潔;邢華;孫強(qiáng);;小鼠體外受精與胚胎移植影響因素的研究[A];動(dòng)物生理生化學(xué)分會(huì)第八次學(xué)術(shù)會(huì)議暨全國(guó)反芻動(dòng)物營(yíng)養(yǎng)生理生化第三次學(xué)術(shù)研討會(huì)論文摘要匯編[C];2004年

10 周燦權(quán);;體外受精與胚胎移植技術(shù)臨床進(jìn)展[A];中華醫(yī)學(xué)會(huì)第五屆全國(guó)計(jì)劃生育學(xué)術(shù)會(huì)議資料匯編[C];2004年

相關(guān)重要報(bào)紙文章 前10條

1 馮衛(wèi)東;英發(fā)明生育輔助“導(dǎo)航系統(tǒng)”[N];科技日?qǐng)?bào);2010年

2 麥迪信;無(wú)針裝置體外受精更便捷[N];醫(yī)藥經(jīng)濟(jì)報(bào);2002年

3 記者 曉姝 通訊員 史紹俊;國(guó)內(nèi)外首例“試管犏�！闭Q生[N];青海日?qǐng)?bào);2012年

4 劉霞;中藥在提高受孕幾率上優(yōu)于西藥[N];科技日?qǐng)?bào);2011年

5 尚喜峰 王共全;我省首次成功為體外受精減胎[N];山西日?qǐng)?bào);2000年

6 記者 錢錚;日允許使用第三方生殖細(xì)胞體外受精[N];新華每日電訊;2008年

7 陳立希;試管受精新法：母親不再受激素之苦[N];新華每日電訊;2007年

8 記者 俞慧友 通訊員 何艷;我“體外受精胚胎遺傳學(xué)診斷”達(dá)世界先進(jìn)水平[N];科技日?qǐng)?bào);2013年

9 李修;家畜性別早知道[N];農(nóng)民日?qǐng)?bào);2002年

10 張麗輝 劉廉君;生物技術(shù)助反芻家畜“早婚多育”[N];科技日?qǐng)?bào);2006年

相關(guān)博士學(xué)位論文 前1條

1 謝蘭;用于精子篩選及體外受精的微流控芯片的構(gòu)建及應(yīng)用[D];清華大學(xué);2010年

相關(guān)碩士學(xué)位論文 前10條

1 許珊珊;接受體外受精—胚胎移植治療的婦女的心理健康狀況及其對(duì)受孕結(jié)果的影響[D];廣西醫(yī)科大學(xué);2013年

2 王倩倩;體外受精母親與子代健康狀況分析[D];浙江大學(xué);2008年

3 潘曉明;不明原因不孕患者體外受精方式的分析[D];浙江大學(xué);2010年

4 賈佩;豬卵巢卵母細(xì)胞體外受精的研究[D];青海大學(xué);2015年

5 劉淑娟;昆白系小鼠體外受精[D];西北農(nóng)林科技大學(xué);2007年

6 吳紅;小鼠體外受精和精子冷凍的研究[D];揚(yáng)州大學(xué);2003年

7 董彬;添加篩選的中藥培養(yǎng)液對(duì)小鼠體外受精及胚胎發(fā)育的影響[D];西北農(nóng)林科技大學(xué);2008年

8 鐘志勝;c-erbB_2與小鼠體外受精及作用機(jī)理研究[D];江西醫(yī)學(xué)院;2001年

9 馮佳時(shí);精子處理方法及β-巰基乙醇對(duì)牛體外受精的影響[D];華中農(nóng)業(yè)大學(xué);2011年

10 魏代敏;卵巢子宮內(nèi)膜異位囊腫對(duì)體外受精—胚胎移植過(guò)程的影響[D];山東大學(xué);2009年

，

本文編號(hào)：2239995