【摘要】：為研究重組豬肺表面活性蛋白A(RpSP-A)的抗病毒活性,采用Bac-to-Bac系統(tǒng)對RpSP-A蛋白進(jìn)行表達(dá)。首先PCR擴(kuò)增目的基因并將其克隆至pFastBac1轉(zhuǎn)移載體獲得pFast-SP-A,通過轉(zhuǎn)化DH10Bac感受態(tài)細(xì)胞獲得重組Bacmid,然后轉(zhuǎn)染sf9細(xì)胞獲得重組桿狀病毒rBV-SP-A,在sf9細(xì)胞上進(jìn)行目的蛋白的表達(dá),經(jīng)鎳柱純化、脫鹽柱處理后,采用蝕斑減少方法評價(jià)RpSP-A對PRRSV感染Marc-145細(xì)胞的抑制作用。結(jié)果顯示RpSP-A在sf9細(xì)胞中得到正確表達(dá),并且能夠降低PRRSV在Marc-145細(xì)胞上的感染,補(bǔ)加Ca~(2+)時(shí)30μg/mL RpSP-A抑制率高達(dá)77%,15μg/mL RpSP-A抑制率為43%,未補(bǔ)加Ca~(2+)時(shí)RpSP-A沒有表現(xiàn)出抑制作用。上述結(jié)果表明利用Bac-to-Bac系統(tǒng)可以穩(wěn)定獲得大量具有抗PRRSV作用的可溶性RpSP-A。
[Abstract]:To study the antiviral activity of recombinant porcine pulmonary surfactant protein A (RpSP-A), RpSP-A protein was expressed by Bac-to-Bac system. Firstly, the target gene was amplified by PCR and cloned into the pFastBac1 transfer vector to obtain pFast-SP-A,. The recombinant Bacmid, was obtained by transforming the DH10Bac receptive cells. Then the recombinant baculovirus rBV-SP-A, was transfected into sf9 cells to express the target protein on sf9 cells. The target protein was purified by nickel column. The inhibition effect of RpSP-A on PRRSV infected Marc-145 cells was evaluated by plaque reduction method after desalination column. The results showed that RpSP-A was correctly expressed in sf9 cells and could reduce the infection of PRRSV on Marc-145 cells. The inhibitory rate of 30 渭 g/mL RpSP-A on Marc-145 cells supplemented with Ca~ (2) was as high as 7715 渭 g/mL RpSP-A, but RpSP-A did not show inhibitory effect without Ca~ (2). These results indicate that a large number of soluble RpSP-A. with anti-PRRSV effect can be obtained stably by using Bac-to-Bac system.
【作者單位】： 江蘇省農(nóng)業(yè)科學(xué)院國家獸用生物制品工程技術(shù)研究中心;江蘇省動(dòng)物重要疫病與人獸共患病防控協(xié)同創(chuàng)新中心;中國農(nóng)業(yè)大學(xué)動(dòng)物醫(yī)學(xué)院;江蘇省農(nóng)業(yè)科學(xué)院畜牧研究所;
【基金】：農(nóng)業(yè)部公益性行業(yè)(農(nóng)業(yè))科研專項(xiàng)經(jīng)費(fèi)項(xiàng)目(201303046)
【分類號】：S852.65

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號：2236202