【摘要】：為制備與豬繁殖與呼吸障礙綜合征病毒(PRRSV)具有反應(yīng)活性的豬源化原核表達(dá)抗體(Pr Ab),本實(shí)驗(yàn)通過流式細(xì)胞技術(shù),以PRRSV GP5蛋白多肽及抗豬Ig G抗體,篩選出能夠與PRRSV抗原表位結(jié)合的陽性B淋巴細(xì)胞,利用RT-PCR從篩選得到的B細(xì)胞的mRNA中擴(kuò)增出編碼抗體重鏈可變區(qū)(VH)基因序列和輕鏈可變區(qū)(VL)基因序列,將擴(kuò)增的可變區(qū)基因序列分別與本實(shí)驗(yàn)室前期克隆的豬源抗體輕鏈恒定區(qū)(CL)和重鏈恒定區(qū)(CH)基因序列連接后,以Linker序列將輕鏈和重鏈全長基因序列相連,構(gòu)建全長的豬源抗體編碼基因(H-linker-L)。將該基因克隆于原核表達(dá)載體p ET-28a中進(jìn)行原核表達(dá)及純化。Western blot鑒定結(jié)果顯示,表達(dá)的重組蛋白能夠被抗豬IgG抗體所識(shí)別,表明表達(dá)的重組蛋白為PrAb;經(jīng)PRRSV包被的ELISA鑒定,PrAb與PRRSV弱毒株CH1R和強(qiáng)毒株HuN4呈陽性反應(yīng),表明所制備的PrAb為PRRSV特異性抗體。本實(shí)驗(yàn)為進(jìn)一步制備診斷PRRS的豬源化重組抗體奠定了基礎(chǔ)。
[Abstract]:In order to prepare porcine prokaryotic expression antibody (Pr Ab),) which reacts with porcine reproductive and respiratory syndrome virus (PRRSV), PRRSV GP5 protein polypeptide and anti-porcine Ig G antibody were used by flow cytometry. The positive B lymphocytes which could bind to PRRSV epitope were screened. The (VH) gene sequence of heavy chain variable region and the (VL) gene sequence of light chain variable region were amplified by RT-PCR from the mRNA of B cell selected. The amplified variable region gene sequence was linked to the light chain constant region (CL) and the heavy chain constant region (CH) gene of porcine antibody cloned in our laboratory, respectively. The light chain and heavy chain full-length gene sequences were linked by Linker sequence. The full-length porcine antibody encoding gene (H-linker-L) was constructed. The recombinant protein was cloned into prokaryotic expression vector p ET-28a for prokaryotic expression and purified. Western blot analysis showed that the expressed recombinant protein could be recognized by anti porcine IgG antibody. The results showed that the expressed recombinant protein was identified by ELISA coated with PrAb; and identified as a positive reaction with PRRSV attenuated CH1R and virulent HuN4, indicating that the prepared PrAb was PRRSV specific antibody. This study laid a foundation for the further preparation of porcine recombinant antibodies for diagnosis of PRRS.
【作者單位】： 中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院哈爾濱獸醫(yī)研究所獸醫(yī)生物技術(shù)國家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室/豬傳染病研究室;
【基金】：哈爾濱市杰出青年基金項(xiàng)目(2014RFYYJ003)
【分類號(hào)】：S852.65

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本文編號(hào)：2236073