【摘要】：近年來以豬(Sus scrofa)胚胎為材料的科學(xué)研究和動(dòng)物生產(chǎn)快速發(fā)展,胚胎需求量增大,而豬胚胎、配子冷凍保存不成熟,體外受精胚胎發(fā)育率低,容易出現(xiàn)多精受精,因此需要建立一套快捷、高效的豬體外生產(chǎn)健康胚胎的技術(shù)體系。本研究集成并優(yōu)化了豬精液冷凍、卵母細(xì)胞成熟和卵母細(xì)胞胞質(zhì)單精子注射(intracytoplasmic sperm injection,ICSI)技術(shù),建立了一套體外高效生產(chǎn)豬胚胎的技術(shù)體系。首先建立了穩(wěn)定的豬卵母細(xì)胞成熟體系,其孤雌激活胚胎卵裂率和囊胚發(fā)育率分別為79.51%和32.30%。然后利用新鮮精液和冷凍精液進(jìn)行體外受精(in vitro fertilization,IVF),胚胎卵裂率分別為49.89%和28.30%,囊胚發(fā)育率分別為31.44%和10.55%。利用新鮮精液進(jìn)行IVF獲得的胚胎卵裂率和囊胚發(fā)育率均明顯高于冷凍精液(P0.05)。進(jìn)一步進(jìn)行了ICSI實(shí)驗(yàn),卵母細(xì)胞胞質(zhì)注射冷凍精子單精子體外生產(chǎn)的豬胚胎卵裂率、囊胚發(fā)育率分別為83.00%和23.32%,而新鮮精液常規(guī)IVF受精卵卵裂率、囊胚發(fā)育率分別為49.89%和31.44%。ICSI胚胎囊胚發(fā)育率低于新鮮精液IVF受精卵和卵母細(xì)胞孤雌激活胚胎的囊胚發(fā)育率,但對(duì)于總體囊胚獲得率,卵母細(xì)胞胞質(zhì)注射冷凍精子體外生產(chǎn)豬胚胎明顯高于新鮮精液IVF方法。研究工作為科研和生產(chǎn)所需豬健康胚胎提供了有效的、廉價(jià)的制備技術(shù)體系。
[Abstract]:In recent years, the scientific research and animal production based on porcine (Sus scrofa) embryos have developed rapidly, and the demand for embryos has increased. However, pig embryos and gametes are immature in cryopreservation, and the rate of development of IVF embryos is low, and polysperm fertilization is easy to occur. Therefore, it is necessary to establish a rapid and efficient technique system for the production of healthy embryos in vitro. In this study, we integrated and optimized porcine semen freezing, oocyte maturation and oocyte cytoplasmic sperm injection (intracytoplasmic sperm injection,ICSI) techniques, and established a set of in vitro efficient production of porcine embryos. Firstly, a stable maturation system of porcine oocytes was established. The cleavage rate and blastocyst development rate of parthenogenetic activated embryos were 79.51% and 32.30%, respectively. The cleavage rate of embryo was 49.89% and 28.30%, and the blastocyst development rate was 31.44% and 10.55%, respectively. The cleavage rate and blastocyst development rate of IVF with fresh semen were significantly higher than that of frozen semen (P0.05). Further ICSI test showed that cleavage rate and blastocyst development rate of porcine embryos produced by oocyte cytoplasmic injection of frozen sperm in vitro were 83.00% and 23.32%, respectively, while the cleavage rate of fresh semen routine IVF fertilized eggs was 83.00% and 23.32%, respectively. The blastocyst development rate was 49.89% and the blastocyst development rate of 31.44%.ICSI embryos was lower than that of fresh semen IVF fertilized oocytes and parthenogenetic embryos, but the overall blastocyst rate was obtained. The in vitro production of porcine embryos by oocyte cytoplasmic injection of frozen spermatozoa was significantly higher than that of fresh semen IVF. The research provides an effective and inexpensive preparation system for pig healthy embryos for scientific research and production.
【作者單位】： 北京農(nóng)學(xué)院動(dòng)物科技學(xué)院;中山大學(xué)孫逸仙紀(jì)念醫(yī)院;中國農(nóng)業(yè)大學(xué)農(nóng)業(yè)生物技術(shù)國家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室;
【基金】：國家自然科學(xué)基金青年科學(xué)基金(No.31601941) 國家重點(diǎn)基礎(chǔ)研究發(fā)展計(jì)劃(973)項(xiàng)目(No.2016YFA0100202) 北京市自然科學(xué)基金(No.6152004) 北京市教委一般項(xiàng)目(No.PXM2016_014207_000008) 北京市大學(xué)生科研訓(xùn)練項(xiàng)目(No.5046516564/003) 2015校級(jí)科研水平提高經(jīng)費(fèi)-高級(jí)別科研項(xiàng)目培育(No.1086716274)
【分類號(hào)】：S828

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本文編號(hào)：2233702