【摘要】：【目的】禽痘病毒(FPV)是痘病毒科禽痘病毒屬的成員。FPV因其基因組龐大,含有大量復(fù)制非必需區(qū),目前作為活病毒載體在禽類和哺乳動(dòng)物中廣泛使用。重組位點(diǎn)的選擇是禽痘病毒載體構(gòu)建的先決條件,外源基因的插入不影響病毒復(fù)制是篩選插入位點(diǎn)的前提。因此,鑒定可供外源基因插入的復(fù)制非必需位點(diǎn)將為重組病毒的構(gòu)建提供更多選擇。本研究擬鑒定FPV NX10株胸苷激酶(TK)基因在病毒復(fù)制中的必要性�！痉椒ā恳訲K基因作為靶基因,增強(qiáng)型綠色熒光蛋白(EGFP)為篩選標(biāo)記構(gòu)建轉(zhuǎn)移載體,FPV NX10株為親本病毒,通過(guò)同源重組篩選重組病毒r FPV-ΔTK-EGFP。通過(guò)在CEF細(xì)胞培養(yǎng)物中添加5-溴脫氧尿苷(BUd R)驗(yàn)證TK基因在FPV復(fù)制中的作用�！窘Y(jié)果】構(gòu)建了轉(zhuǎn)移載體p UC19-TK AB-EGFP。在轉(zhuǎn)染后重組病毒克隆純化過(guò)程中,蝕斑克隆中綠色熒光病變所占的比例逐漸增加,但在熒光蝕斑的邊緣能觀察到不帶熒光病變的存在。對(duì)第9-15輪隨機(jī)選取的蝕斑克隆的Western blot分析表明,重組病毒中插入的EGFP基因均能夠正確表達(dá),但PCR結(jié)果顯示在重組病毒中始終存在野生型病毒。在細(xì)胞培養(yǎng)液中添加BUd R后,重組病毒不能繼續(xù)生長(zhǎng)�！窘Y(jié)論】FPV NX10毒株TK基因在該病毒的復(fù)制中不是完全非必需的。
[Abstract]:[objective] fowlpox virus (FPV) is a member of the genus of poxvirus. FPV is widely used as a vector of live viruses in poultry and mammals because of its large genome and a large number of non-essential regions for replication. The selection of recombinant sites is a prerequisite for the construction of avian pox virus vectors, and the insertion of foreign genes does not affect the replication of viruses. Therefore, identification of non-essential replication sites for foreign gene insertion will provide more options for the construction of recombinant viruses. The purpose of this study was to identify the necessity of thymidine kinase (TK) gene in viral replication of FPV NX10 strain. [methods] TK gene was used as target gene and enhanced green fluorescent protein (EGFP) was used as screening marker to construct transfer vector NX10 strain as parent virus. Screening recombinant virus r FPV- 螖 TK-EGFP. by homologous recombination The role of TK gene in FPV replication was verified by adding 5-bromodeoxyuridine (5-bromodeoxyuridine) into CEF cell culture. [results] the transfer vector p UC19-TK AB-EGFP. was constructed. In the process of cloning and purification of recombinant virus after transfection, the proportion of green fluorescent lesions in plaque clones increased gradually, but the presence of no fluorescent lesions could be observed at the edge of fluorescent plaque. The Western blot analysis of the randomly selected plaque clones from the 9th to 15th rounds showed that the EGFP gene inserted in the recombinant virus could be expressed correctly, but the PCR results showed that the wild-type virus was always present in the recombinant virus. After the addition of BUd R in cell culture medium, the recombinant virus could not continue to grow. [conclusion] the TK gene of FPV NX10 strain is not completely unnecessary in the replication of the virus.
【作者單位】： 中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院哈爾濱獸醫(yī)研究所獸醫(yī)生物技術(shù)國(guó)家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室禽呼吸道病創(chuàng)新團(tuán)隊(duì);東北農(nóng)業(yè)大學(xué)動(dòng)物科學(xué)技術(shù)學(xué)院;
【基金】：中國(guó)博士后科學(xué)基金面上項(xiàng)目(No.2014M560245) 國(guó)家科技支撐計(jì)劃項(xiàng)目(No.2015BAD12B03,2015BAD12B05-05)~~
【分類號(hào)】：S852.65

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