【摘要】：現(xiàn)有的動物疫病診斷技術多是針對單一病原檢測,而動物疫病的流行通常是多種病原混合感染,目前的診斷技術不能很好地滿足國境口岸快速、高通量檢疫的需求,一直以來多重檢測技術的研究是動物疫情監(jiān)測、疫病控制領域關注的焦點。本試驗在前期豬病混合感染診斷研究基礎上,進一步利用多重連接探針擴增(MLPA)技術,以藍舌病病毒(BTV)、牛傳染性鼻氣管炎病毒(IBRV)、牛病毒性腹瀉病毒(BVDV)、牛地方流行性白血病病毒(EBLV)和口蹄疫病毒(FMDV)為研究對象,分別設計這5種牛病毒的MLPA探針,將這5種探針混合,建立可以同時檢測這5種病毒的MLPA擴增方法。特異性試驗表明:每種病毒的探針都是特異的,只能識別各自的目的片段,不能擴增出其他相關病毒,探針之間也不存在交叉反應;敏感性試驗結果表明:5重MLPA擴增的最低檢測限可以達到單個病毒核酸的2 000個拷貝。經過對136份臨床樣品的檢測,該方法與現(xiàn)有熒光PCR方法的符合率達到100%,能夠正確地檢測出每份陰、陽性樣品及混合感染樣品。本研究建立的5種病毒MLPA檢測方法可以實現(xiàn)1次采樣,1次分析,同時檢測5種牛病毒的目的,該技術特異性強、敏感性高,加之其多重性檢測的優(yōu)勢,有望成為未來疫病檢測的新方向。
[Abstract]:Most of the existing diagnostic techniques for animal epidemic diseases are aimed at the detection of a single pathogen, and the prevalence of animal epidemic diseases is usually a mixture of various pathogens. The current diagnostic techniques cannot well meet the needs of rapid and high-throughput quarantine at border ports. The research of multiple detection techniques has been the focus of animal epidemic surveillance and epidemic control. On the basis of the previous studies on the diagnosis of mixed infection of swine disease, the multiplex (MLPA) technique was further used in this experiment. The five bovine infectious rhinotracheitis virus (BTV),) bovine infectious rhinotracheitis virus (BTV), bovine viral diarrhea virus (BVDV), bovine endemic leukemia virus (EBLV) and foot-and-mouth disease virus (FMDV) were studied. A MLPA amplification method for simultaneous detection of these five viruses was established. The specificity test showed that the probes of each virus were specific and could only identify their target fragments and could not amplify other related viruses and there was no cross reaction between the probes. The sensitivity test results showed that the minimum detection limit of MLPA amplification was 2 000 copies of a single virus nucleic acid. The coincidence rate between this method and the existing fluorescent PCR method was 100, and each negative, positive and mixed infected sample could be detected correctly. In this study, the MLPA detection method of five viruses can be used to detect five kinds of bovine viruses at the same time. The method has the advantages of high specificity, high sensitivity and multiple detection. It is expected to be a new direction of disease detection in the future.
【作者單位】： 北京出入境檢驗檢疫局;寧夏出入境檢驗檢疫局;
【基金】：國家質檢總局科技計劃資助項目(2014IK251)
【分類號】：S852.653

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本文編號：2224192