【摘要】：為篩選出日本腦炎病毒(JEV)敏感度高的BHK-21細(xì)胞株,采用終點(diǎn)稀釋法從母代BHK-21混合細(xì)胞中分離單細(xì)胞克隆株,應(yīng)用接種BHK-21克隆株方法,從JEV陽(yáng)性蚊子樣品研磨液中分離病毒,篩選出的3號(hào)單細(xì)胞克隆株經(jīng)3次傳代后細(xì)胞產(chǎn)生明顯病變,分離到1株JEV,5號(hào)單克隆株培養(yǎng)物核酸檢測(cè)呈陽(yáng)性,但是不產(chǎn)生細(xì)胞病變,母代混合細(xì)胞沒(méi)有病變,JEV核酸檢測(cè)陰性。根據(jù)1、3型JEV的prM與E基因設(shè)計(jì)4對(duì)引物初步鑒定分離株基因型,鑒定分離株為1型JEV。綜合以上結(jié)果,構(gòu)建的BHK-21單細(xì)胞克隆株比BHK-21混合細(xì)胞對(duì)分離JEV株敏感,更適合JEV的分離與培養(yǎng)。
[Abstract]:In order to screen Japanese encephalitis virus (JEV) highly sensitive BHK-21 cell lines, single cell clones were isolated from maternal BHK-21 mixed cells by end point dilution method, and the virus was isolated from the grinding fluid of JEV positive mosquito samples by inoculating BHK-21 clone strain. After three passages, a single cell clone strain No. 3 was isolated, and one JEV, 5 monoclonal cell culture showed positive nucleic acid detection, but no cytopathic effect, and the maternal mixed cell had no pathological changes and was negative for nucleic acid detection. Four pairs of primers were designed to identify the genotype of the isolated strain according to the prM and E gene of type 1 JEV, and the isolated strain was identified as type 1 JEV.. Combined with the above results, the constructed BHK-21 single cell clone was more sensitive to the isolation of JEV than the BHK-21 mixed cell, and was more suitable for the isolation and culture of JEV.
【作者單位】： 湖南農(nóng)業(yè)大學(xué)動(dòng)物醫(yī)學(xué)院;
【基金】：湖南省科技廳重點(diǎn)課題(2012NK2001)
【分類(lèi)號(hào)】：S852.65

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本文編號(hào)：2203040