【摘要】：為配合豬瘟新型疫苗的研發(fā),建立了豬瘟病毒NS3蛋白抗體檢測間接ELISA,以期達(dá)到有效區(qū)分新型疫苗免疫豬與自然感染豬(包括常規(guī)疫苗接種豬)的目的。以接種豬瘟病毒(CSFV)石門株的PK-15細(xì)胞為模板提取總RNA,經(jīng)特異性PCR擴(kuò)增獲得長度為2 049bp的CSFV NS3基因,將其克隆至插入了具有自聚集自切割功能短肽的原核表達(dá)載體pET-32a(+),在大腸埃希菌Rosetta(DE3)中優(yōu)化表達(dá)CSFV石門株NS3基因。Western blot分析表明重組蛋白NS3具有反應(yīng)原性。將純化的重組蛋白NS3作為包被抗原建立檢測CSFV NS3抗體的間接ELISA,以美國愛德士(Idexx)豬瘟病毒抗體檢測試劑盒抗體檢測結(jié)果為標(biāo)準(zhǔn),對502份血清樣品進(jìn)行檢測。結(jié)果表明,所建立方法的特異性為96.9%,敏感性為89.7%,總符合率為95.8%,為豬瘟新型疫苗的推廣應(yīng)用提供了血清學(xué)檢測方法。
[Abstract]:In order to cooperate with the research and development of new swine fever vaccine, an indirect Elisa was established for detection of NS3 protein antibody of swine fever virus (CSFV), in order to effectively distinguish vaccinated pigs from naturally infected pigs (including routine vaccinated pigs). Total RNAs were extracted from PK-15 cells inoculated with Schimen strain of classical swine fever virus (CSFV), and the 2 049bp CSFV NS3 gene was amplified by specific PCR. The recombinant protein NS3 was cloned into the prokaryotic expression vector pET-32a (), with self-aggregation and self-cleavage function and was optimized to express NS3 gene of CSFV Shimen strain in Escherichia coli Rosetta (DE3). Western blot analysis showed that the recombinant protein NS3 was reactive. The purified recombinant protein NS3 was used as the coating antigen to establish indirect Elisa for detection of CSFV NS3 antibody. 502 serum samples were detected according to the results of the antibody detection kit for (Idexx) swine fever virus in the United States. The results showed that the specificity of the method was 96.9.9, the sensitivity was 89.7and the total coincidence rate was 95.8%, which provided a serological method for the popularization and application of the new vaccine against swine fever.
【作者單位】： 云南農(nóng)業(yè)大學(xué)動物科學(xué)技術(shù)學(xué)院;
【基金】：國家自然科學(xué)基金項(xiàng)目(31560704) 云南農(nóng)業(yè)大學(xué)自然科學(xué)基金項(xiàng)目(2016ZR12)
【分類號】：S852.651

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