發(fā)布時(shí)間：2018-08-05 14:23

【摘要】：本研究旨在建立一種快速檢測(cè)牛支原體(Mycoplasma bovis)的實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測(cè)方法。根據(jù)GenBank中收錄的牛支原體OPPD/F基因序列(登錄號(hào):AF130119),利用Primer 5.0軟件設(shè)計(jì)特異性引物與TaqMan探針,以重組質(zhì)粒作為絕對(duì)定量模板,構(gòu)建檢測(cè)牛支原體的TaqMan實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測(cè)方法。結(jié)果顯示該檢測(cè)方法線性關(guān)系良好,標(biāo)準(zhǔn)曲線的相關(guān)系數(shù)R2=0.994,擴(kuò)增效率E=1.280。熒光定量PCR法檢測(cè)的敏感性是常規(guī)PCR的10倍;特異性良好,檢測(cè)9種相關(guān)細(xì)菌和病毒均為陰性;重復(fù)性好,組內(nèi)及組間樣本檢測(cè)Ct值均小于2%。牛支原體TaqMan實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測(cè)方法較之于常規(guī)PCR方法有快速、特異性強(qiáng)、敏感性高、穩(wěn)定性好的優(yōu)點(diǎn)。
[Abstract]:The aim of this study was to establish a real-time fluorescent quantitative PCR method for rapid detection of Mycoplasma bovis (Mycoplasma bovis). According to the OPPD/F gene sequence of Mycoplasma bovis contained in GenBank (accession number: AF130119), using Primer 5.0 software to design specific primers and TaqMan probes, using recombinant plasmid as absolute quantitative template, a real-time quantitative PCR detection method for Mycoplasma bovis was constructed. The results showed that the linear relationship of the method was good, the correlation coefficient of the standard curve was 0.994, and the amplification efficiency was 1.280. The sensitivity of fluorescence quantitative PCR was 10 times that of conventional PCR, the specificity was good, the detection of 9 related bacteria and viruses was negative, the reproducibility was good, and the Ct value of intra- and inter-group samples was less than 2. Compared with the conventional PCR method, the real-time fluorescence quantitative PCR method for detection of Mycoplasma bovis TaqMan has the advantages of rapidity, specificity, high sensitivity and good stability.
【作者單位】： 內(nèi)蒙古農(nóng)業(yè)大學(xué)獸醫(yī)學(xué)院;包頭市農(nóng)牧業(yè)局;內(nèi)蒙古農(nóng)業(yè)廣播電視學(xué)校錫林郭勒盟分校;巴林右旗農(nóng)牧業(yè)局;內(nèi)蒙古大學(xué)哺乳動(dòng)物生殖生物學(xué)與生物技術(shù)教育部重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室;
【基金】：國家科技支撐計(jì)劃資助項(xiàng)目(2015BAI07B02-06)
【分類號(hào)】：S852.62

【參考文獻(xiàn)】

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【共引文獻(xiàn)】

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【二級(jí)參考文獻(xiàn)】

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【相似文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：2166060