本文選題：ETEC + K�。� 參考：《生物技術(shù)》2017年06期

【摘要】：[目的]構(gòu)建K99、GFP基因重組質(zhì)粒并在大腸桿菌BL21(DE3)感受細(xì)胞中表達(dá)。[方法]利用PCR擴(kuò)增技術(shù)擴(kuò)增K99基因和GFP基因,經(jīng)連接和轉(zhuǎn)化將目的片段克隆到pLA載體上,利用雙酶切技術(shù)及PCR技術(shù)對重組質(zhì)粒進(jìn)行鑒定并測序分析,利用Western Blot技術(shù)分析蛋白質(zhì)表達(dá)情況。[結(jié)果]測序分析結(jié)果表明,基因具有正確的閱讀框;雙酶切和PCR鑒定得到498 bp和720 bp的特異性條帶;熒光檢測表明重組菌表達(dá)了蛋白;Western Blot結(jié)果表明重組菌表達(dá)為融合蛋白。[結(jié)論]成功構(gòu)建了大腸重組菌,并表達(dá)外源融合蛋白。
[Abstract]:[objective] to construct the recombinant plasmid of K99 GFP gene and express it in BL21 (DE3)-receptive cells of Escherichia coli. [methods] K99 gene and GFP gene were amplified by PCR and cloned into pLA vector by ligation and transformation. The recombinant plasmid was identified and sequenced by double enzyme digestion and PCR. Protein expression was analyzed by Western blot. [results] sequencing analysis showed that the gene had the correct reading frame, the specific bands of 498bp and 720bp were identified by double enzyme digestion and PCR, and the recombinant strain expressed protein by Western blot. [conclusion] Recombinant Escherichia coli was successfully constructed and expressed exogenous fusion protein.
【作者單位】： 黑龍江八一農(nóng)墾大學(xué)生命科學(xué)技術(shù)學(xué)院;黑龍江八一農(nóng)墾大學(xué)動物科技學(xué)院;
【基金】：黑龍江省自然科學(xué)基金項(xiàng)目(“ETEC K99特異性s Ig A-抗原復(fù)合物反向轉(zhuǎn)運(yùn)的黏膜免疫機(jī)制”,No.C2017047) 黑龍江省墾區(qū)科研課題(“規(guī)�；i場病毒性腥瀉新型黏膜疫苗的應(yīng)用與示范”,No.HNK135-04-06-04) 黑龍江八一農(nóng)墾大學(xué)研究生創(chuàng)新科研項(xiàng)目(“針對ETEC K99的特異性SIg A免疫排除功能研究”,No.YJSCX2015-Y59)
【分類號】：S852.61

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