本文選題：豬流行性腹瀉病毒 + 單克隆抗體��； 參考：《河北農(nóng)業(yè)大學學報》2017年04期

【摘要】：為了制備抗豬流行性腹瀉病毒(PEDV)的單克隆抗體(MAb),本試驗將Vero細胞中增殖的PEDV超速離心純化,作為免疫原免疫BALB/c雌性小鼠,采用常規(guī)的淋巴細胞雜交瘤技術(shù)和PEDV重組S蛋白為基礎(chǔ)的間接ELISA方法,制備并篩選能穩(wěn)定分泌PEDV特異性抗體的雜交瘤細胞;分別采用間接ELISA、Western blot和間接免疫熒光(IFA)試驗,對單克隆抗體的亞型、特異性等生物學特性進行鑒定。結(jié)果表明,本試驗成功獲得了1株穩(wěn)定分泌PEDV特異性抗體的雜交瘤細胞株5C3。MAb亞類鑒定為IgM,輕鏈為k型。雜交瘤細胞連續(xù)傳至20代,細胞培養(yǎng)上清液和小鼠腹水抗體效價分別穩(wěn)定在1∶600和1∶10 000。特異性試驗結(jié)果顯示,MAb不與豬傳染性胃腸炎病毒(TGEV)、豬偽狂犬病毒(PrV)、豬圓環(huán)病毒(PCV2)發(fā)生交叉反應。western-blot結(jié)果顯示,MAb能特異性識別PEDV的重組S蛋白。IFA試驗結(jié)果表明,MAb能與PEDV感染的vero細胞產(chǎn)生特異性熒光。說明本試驗獲得的MAb能特異性識別重組及天然的PEDV S蛋白,具有良好的抗原性和特異性。
[Abstract]:In order to prepare monoclonal antibody (MAB) against porcine epidemic diarrhea virus (PEDV), the proliferating PEDV in Vero cells was purified by ultracentrifugation. Using routine lymphocyte hybridoma technique and indirect Elisa based on PEDV recombinant S protein, hybridoma cells secreting specific antibodies to PEDV were prepared and screened, and indirect ELISAV Western blot and indirect immunofluorescence (IFA) tests were used, respectively. The subtype and specificity of monoclonal antibody were identified. The results showed that a hybridoma cell line 5C3. MAb which stably secreted PEDV specific antibody was successfully identified as IgM and light chain as k type. The antibody titers of supernatant of cell culture and ascites of mice were stable at 1: 600 and 1:10 000, respectively. The results of specific test showed that MAB did not cross react with porcine transmissible gastroenteritis virus (TGEV), porcine pseudorabies virus (PRV) and porcine circovirus (PCV2). PEDV-infected vero cells produced specific fluorescence. The results showed that MAB could specifically recognize recombinant and natural PEDV S protein, and had good antigenicity and specificity.
【作者單位】： 河北農(nóng)業(yè)大學動物醫(yī)學院;河北省動物疫病預防控制中心;
【基金】：河北省自然科學基金項目(C2015204121) 河北農(nóng)業(yè)大學百名青年學術(shù)帶頭人培養(yǎng)計劃
【分類號】：S852.651

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本文編號：2084493