發(fā)布時間：2018-06-29 23:28

  本文選題：分子對接 + 噬菌體裂解酶�。� 參考：《中國獸醫(yī)學(xué)報》2017年03期

【摘要】：金黃色葡萄球菌噬菌體裂解酶LysGH15對金葡菌表現(xiàn)出廣譜高效的抗菌活性,本課題組已深入研究其三維結(jié)構(gòu),其中CHAP片段是LysGH15起催化作用的關(guān)鍵活性片段。本試驗進(jìn)一步通過分子模擬和對接的方法預(yù)測出CHAP與底物多肽DGlnNH2-LLys-DAla-5Gly結(jié)合的"口袋"結(jié)構(gòu),該結(jié)構(gòu)由D33、S35、F36、Y50、R71、T72及N75這些氨基酸位點組成。由于脂肪族非極性氨基酸丙氨酸側(cè)鏈最短且不帶電荷,因此將這些位點均突變?yōu)楸彼?逐一研究它們對CHAP片段催化活性的影響:圓二色譜試驗結(jié)果說明突變體二級結(jié)構(gòu)并未發(fā)生變化;酶譜試驗結(jié)果定性的說明F36突變?yōu)楸彼岷笸蛔凅w蛋白F36A的活性完全喪失,而其他位點的氨基酸突變后蛋白活性并未發(fā)生明顯改變;細(xì)菌濁度測定和菌落計數(shù)試驗進(jìn)一步證明突變體F36A活性完全喪失,而其他突變體活性不變;鑒于F36位于"口袋"結(jié)構(gòu)的"口"的部位,36位氨基酸很可能參與到CHAP與底物多肽的結(jié)合。本試驗鑒定了LysGH15的CHAP與底物多肽互作過程中起關(guān)鍵作用的氨基酸位點。
[Abstract]:The bacteriophage lyase LysGH15 of Staphylococcus aureus showed broad-spectrum and high-efficient antibacterial activity against Staphylococcus aureus. The three-dimensional structure of LysGH15 has been studied in depth, and chap fragment is the key active fragment of LysGH15. In this experiment, the pocket structure of chap combined with DGlnNH2-Lys-DAla-5Gly was predicted by molecular simulation and docking. The structure was composed of amino acid sites such as D33, S35F36, Y50, R71T72 and N75, which were composed of two amino acids, DGlnNH2-Lys-DAla-5Gly, DGlnNH2-Lys-DAla-5Gly. Because the alanine side chain of aliphatic nonpolar amino acid is the shortest and without charge, these sites are mutated to alanine. The results of circular dichroism showed that the secondary structure of the mutant did not change, and the result of zymogram showed that the activity of protein F36A was completely lost after the mutation of F36 into alanine. But the protein activity of other amino acid mutation did not change obviously, the bacterial turbidity test and colony count test further proved that the activity of the mutant F36A was completely lost, while the activity of other mutants was unchanged. Since F 36 is located in the "mouth" of the "pocket" structure, the 36 amino acid is likely to be involved in the binding of chap to the substrate polypeptide. The amino acid sites of LysGH15 were identified which played a key role in the interaction between chap and substrate peptides.
【作者單位】： 吉林大學(xué)動物醫(yī)學(xué)學(xué)院;吉林大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院;江蘇高校動物重要疫病與人獸共患病防控協(xié)同創(chuàng)新中心;
【基金】：國家自然科學(xué)基金資助項目(31130072);國家自然科學(xué)基金面上資助項目(31572553);國家自然科學(xué)基金青年資助項目(31502103)
【分類號】：S852.61

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本文編號：2083832